微生物学及检验技术例1

关键词：食品微生物检验；教学内容；教学改革；职业教育

Key words: food microbiological testing；teaching content；teaching reform；vocational education

中图分类号：G42 文献标识码：A文章编号：1006-4311（2010）33-0192-01

1教学内容改革的必要性

传统的食品微生物课程是理论部分与实验部分分开独立设置教学内容，是按学科体系进行构建的，不符合职业教育的特点，也不能更好地实现教学与工作岗位的零距离对接。这就需要按照食品微生物检验工作过程中的实际需要的技能与素质重新构建教学内容，将原有的食品微生物、食品微生物实验、食品微生物检验进行分解，找出其中与从事食品微生物检验工作相关的理论知识、方法技能、职业素质进行重新整合，并添加了食品微生物检验国家标准、样品的采样技术等内容，形成工学结合的教学项目，从而实现培养食品微生物检验职业技术能力的目标。

2教学内容改革的准备工作

2.1 调查工作岗位需求、实习生、毕业生工作情况、食品行业检验发展趋势，明确以下内容：①明确课程的性质与作用。《食品微生物检验》是一门实践性、技术性很强的专业课程，这门课程的掌握能使学生具备必需的基本检验知识与技能、严谨求实的科学态度、食品质量与安全观念、爱岗敬业的职业素养，互助合作的团队精神等，为今后的持续发展奠定了基础。因此，高职学生对《食品微生物检验技术》这门课掌握的程度，关系到今后能否通过食品检验职业资格考试及能否胜任食品微生物检验的相关工作岗位。②明确职业面向与岗位。食品营养与检测专业毕业生主要面向食品工业领域以及相关单位，从事食品检验、食品生产安全指导、食品经营管理等工作。 面向单位有各种食品加工厂、各级食品质量监督部门、各级卫生防疫站、海关、商检局、各经营检验设备单位、各种大中型饭店、食品市场、农贸市场等单位。

2.2 讨论分析调查结果，确定以下内容：①确定岗位能力、岗位知识、岗位素质构成与要求：通过对食品检验岗位工作任务和职业能力调查与分析，明确了食品微生物检验岗位所必须具备的基本技能与素质和相关微生物学知识。如：能够切实承担某一专项检验项目；能够阅读理解并执行国家相关标准；能够进行有效沟通；能够具备分析检验结果，并对生产过程提出建议的能力；能够掌握食品微生物学及检验的基本知识；具有敬业爱岗的良好职业道德，严谨的科学态度和实事求是的工作作风等。②确定课程目标：依据岗位实际工作任务所需要的知识、能力、素质要求，确定了课程的能力目标、知识目标和素质目标。如：能够掌握食品微生物检验的基础理论知识、常规项目的检验原理，了解检验新技术的发展概况；能够正确掌握微生物检验的方法和技能等。

3教学内容改革的具体内容

根据以上的调查结果设计了教学内容改革的具体内容。

3.1 仔细研究食品微生物检验的每个项目，将检验中需要掌握的技术及素质进行归纳：①基本操作技术：包括检样制备技术、培养基制备技术、玻璃器皿的洗涤、包扎与灭菌技术、系列稀释技术、显微直接计数技术、显微镜观察微生物形态技术、细胞大小的测定技术、微生物接种与分离纯化技术、微生物的染色技术、生化鉴定技术、血清学鉴定技术、菌落计数及报告技术、快速检测技术等。②职业素质：包括敬业爱岗的精神、实事求是的工作作风、团结合作的意识、严谨的科学态度、分析检验结果对生产过程提出建议的能力、理解与运用相关文件的能力等。

3.2 根据检验中需要掌握的技术及素质选取课程教学内容：①压缩理论教学内容。食品微生物检验技术就是应用微生物学的理论和方法，对食品中的菌落总数、大肠菌群及致病菌等进行检测。因此可以将理论知识融入到实验教学中，做到理论与实践的有机结合。②删除与食品微生物检验无关的内容。为保证教学与实际检验工作的紧密结合，新的课程教学内容应该是围绕食品微生物检验工作岗位需求，按食品微生物检验项目和检验方法选取的检验工作过程中常用的操作技能与相关知识选取的。因此像微生物生物学特性、微生物代谢、营养物质的传递、食品腐败变质的机理、微生物遗传变异与育种等内容可以舍弃，使课程更适用、实用。③增加与微生物检验相关的内容，如：2010版食品微生物检验国家标准内容、快速测试纸片技术、样品的采样技术等内容。

微生物学及检验技术例2

微生物检测技术是依据微生物学理论，结合现代免疫学和自动化仪器等理论知识与技术，通过科学检测方法进行病原微生物种类、数量和性质等方面的研究，具有检测速度快、检验的灵敏度高和检验结果准确等优点。因此，分析微生物检测技术在食品检验中的应用方法，对保障食品安全性，为社会民众创造良好食品环境有着重要的意义。

1 食品检验的重要性及操作基础

1.1食品检验的重要性 食品检验不仅关系到社会民众的身体健康，而且在市场监管、产品贸易和食品质量的安全评价中起着重要的支撑作用，对食品行业的持续健康发展有着积极的推动作用。同时，食品检验与社会民众的身体素质息息相关如果食品检验没有做到规范与合格，会降低社会民众的工作效率，进而对社会的发展产生不利影响。

1.2食品检验中的操作基础 食品检验的操作基础主要包括样品采集与保管、试样制备与预处理和食品检测技术的选择等。在样品采集的过程中，采集人员需要保证采集样品的代表性，并妥善保管采集的样品，避免因外界因素对样品造成干扰。在进行样品检测前，检测人员可以采用蒸馏、层析、透析、沉析和浓缩干燥等方法，去除样品中无分析价值的杂质，以保证检测结果的准确性与可靠性。在选择检测技术和检测方法时，检测人员需要考虑样品的特性、检测的要求和实验室条件等多方面的因素，保证检测技术与检测方法的适用性。

2 微生物检测技术的特点与基本的检测技术

2.1微生物检测技术的特点 在食品检验中，微生物检测技术主要有如下特点：①检验的范围比较广，包括有食品工业的微生物，如保健食品中的双歧杆菌和乳酸菌等；人类疾病、畜禽疫病和共有传染病中的病原微生物，可以通过食物途径进行传播，数量高达数百种；可以引起食品腐败和变质的微生物等；②食品维生素的检验需要保证快速准确，并且检验样品需要有一定的数量，检验的结果需要赋予法律性质，且受到的干扰因素较多。

2.2微生物基本检测技术 在食品检验中，微生物检验的流程为常见的致病菌检验大肠杆菌菌群计数菌落总数的计数。其中常见致病菌主要指致病性的大肠菌、沙门氏菌、弯曲菌属和肠炎弧菌等。传统检验方法为血清试管凝聚实验、血清学分型、生化试验、毒性试验、噬菌体分型和微生物的形态检查等；常用的试验操作为明胶试验、甲基红试验、V-P试验、淀粉水试验、硝酸盐的还原试验和糖酵解试验等。传统的微生物检验方法准确性较高，检验结果相对可靠，但是其操作繁琐，耗费时间较长，涉及的试验比较多，无法满足食品检验的快速便捷要求。

3 微生物的快速检测技术

微生物快速检测技术主要为如下三种方法：①电阻电导测定法。该方法是利用全自动微生物检测计数仪，通过分析食品样品的电容抗、电阻抗和总阻抗等不同参数，测定样品的污染程度，其原理是在细菌进行防治和生产时，将蛋白质和糖类等大分子物质分解为有机酸和氨基酸等小分子物质，改变并测量培养液的导电度与电阻变化，从而推算出其原样品的含菌数；②生物传感器法。生物传感是利用与生物活性物质进行物理变化和化学变化时产生的感应，以物理换能器和化学换能器对其进行捕捉，并通过离散或连续数字电信号将反应程度表达出俩，从而得到分析物浓度。生物传感器法的优势是特异性较高，灵敏度较高，可以满足复杂样品检测的要求。

4 微生物检测技术在食品检验中的应用

4.1食源性病原菌免疫学检测技术在食品检验中的应用 在免疫学的检测技术中，很多造价低的检验仪器设备得到很好应用，其操作简单便捷，检验的实用性比较强。在检测食品中的微生物时，免疫学检测技术应用非常广泛，如检测食源性寄生虫和葡萄球菌菌素等，在保障食品免疫中发挥着重要作用。

4.2核酸探针技术在食品检验中的应用 在食品检验中，核酸探针可以快速检测食品中大肠杆菌的情况，从而对食品安全性提供正确评价。例如在检测单增李斯特菌时，可以直接利用核酸探针进行检测。核酸探针检测技术比较复杂，需要的检测费用与成本也较高，所以很多时候的检测主要是在实验室中完成，在一定程度上制约了其在食品检验中的普及度。

4.3多聚酶链反应技术在食品检验中的应用 多聚酶链反应技术的特异性较强，敏感度也比较高，在食品检验中的应用比较广泛。曾有检测证明，在检测31株不同的菌株时，利用FQ-PCR检测技术，最终发现其中23株菌株为阴性，8株副溶血弧菌检测为阳性。同时，多聚酶链反应技术可以检测食品中金黄色葡萄球菌和肠出血性大肠杆菌等，检测结果的准确性也比较高。

4.4生物芯片技术在食品检验中的应用 在一次性食品检验中，生物芯片技术既能检测出食品中致病菌，而且可以检测出许多隐藏致病菌，其操作简单，检测的敏感性高，可以通过一次检测得到全部检测结果。曾有检测证明，将15种细菌的16srDNA通过引物扩增，让后与芯片探针进行杂交，从而检测出食品中致病菌。虽然生物芯片技术的优点很多，但是由于芯片比较复杂，该技术仍然在试验阶段，其应用范围也不太广泛。

4.5生物传感器检测技术在食品检验中的应用 导致食品腐败变质的微生物多种多样，如真菌、细菌和病毒等，其中因细菌导致食品变质情况最为常见。病原菌和腐败菌是造成食物污染的微生物组成部分，腐败菌自身并不会致病，只是通过将食品成分分解与破坏，从而使食物腐败变质，进而产生有害物质而危害人们身体健康。生物传感器检测技术可以准确检验出食品中的微生物，如乳酸菌、酿酒酵母和枯草芽孢杆菌等腐败菌数量；沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌等病原菌；真菌毒素、藻类毒素、新军毒素等生物毒素等。但是由于该技术还需要进一步完善，所以在实际的食品检验中应用有限。

5 结语

在食品检验中，传统检测技术和方法不仅检测时间长，而且检测过程复杂繁琐，检测的结果也不易判断，而借助新检测技术与检测仪器设备，可以有效提高食品检验检测技术的实用性与准确性。检测人员只有把握各种检测技术的特点及适用范围，在检测时做到细致认真、规范操作，才能真正保障检测质量，对食品的安全性给出正确评价，为社会民众创造安全的食品环境。

参考文献：

[1]贾妮娜.微生物检测技术在食品检验中的应用[J].中国卫生产业，2015，01：21+23.

微生物学及检验技术例3

中图分类号：G712 文献标识码：B

文章编号：1671-489X（2017）02-0084-03

Course Design of Food Microorganism Inspection Technology//ZHENG Peijun

Abstract To talent training objective of food nutrition and testing as

the starting point， analysis of professional post office requirements，based on the post core ability， study of food microorganism inspec-tion technology course，then respectively from the curriculum na-

ture and orientation， curriculum goal， curriculum design， teaching design， teaching implementation， teaching evaluation of six aspects， the paper introduces the whole teaching of the course design of food microorganism inspection technology.

Key words food microorganism inspection technology； course de-sign； teaching evaluation

1 n程性质与定位

食品微生物检验技术是食品营养与检测专业课程体系中一门工学结合的核心课程，是食品检验三大工作岗位群课程之一，是培养学生食品检验技能的重要课程，是实践性、技术性很强的一门课程。

食品微生物检验技术课程培养食品营养与检测专业学生微生物检验检测技能，针对检验员、现场QC与QA等职业岗位要求而开设。通过学习食品微生物检验的基础理论与技能，具备微生物检验的能力及职业素质，获取食品检验工职业资格证书。按照国标及工作要求，及时、准确地对食品样品做出检验报告，为食品安全生产及卫生监督提供科学依据[1]。

2 课程目标

总目标 通过对本课程的学习，使学生掌握食品微生物检验的基础理论知识、常规项目的检验原理，了解检验新技术的发展概况。经过学习，学生具备代表性取样、微生物检验与分析和质量控制的能力。为通过食品检验工职业资格考试储备知识和技能，可胜任食品行业检验岗位中食品原料至成品的微生物检验工作。

专业能力目标 能够熟练使用及维护显微镜；能够包扎微生物检验常用玻璃仪器；能够熟练使用微生物检验常用的设备；能进行微生物的制片及形态观察；能进行微生物大小测定及计数；能进行培养基的配制及灭菌；能进行微生物的分离接种及纯培养；能进行微生物的简单染色及革兰氏染色；能够对微生物检验样品进行处理；能够进行微生物卫生指标菌及重要致病菌的检验；能够正确记录实验结果及撰写实验报告；能够独立根据给定的微生物检验标准进行微生物检验、分析工作。

知识目标 掌握微生物检验技术的基础理论；掌握微生物检验的相关的国家标准；掌握微生物检验的基本方法；熟悉微生物生化反应分析；了解微生物血清学实验分析；掌握食品微生物检验取样操作；掌握样品的保存与制备操作；掌握微生物实验设计与数据处理；掌握实验数据原始记录与实验报告的撰写；掌握食品卫生细菌学的检验方法；掌握食品中病原微生物的检验方法；掌握发酵食品微生物的检验方法。

职业素质目标 重视职业道德教育和法制教育；培养诚信品质、敬业精神和责任意识、团结合作意识；培养严谨的工作作风、实事求是的工作态度；提高实践能力、创造能力、就业能力；提高观察、分析和解决问题的能力；提高生产安全意识及工作防护能力。

3 课程设计思路

按照食品行业检验岗位的任职要求，分析岗位实际工作任务所需的知识、能力、素质要求，并参照食品检验国家职业标准，确定课程的能力目标、知识目标和素质目标[2]。

通过企业调研、专家座谈，以及对毕业生就业进行调查等工作，分析食品微生物检验工作过程中实际需要的技能与素质，重新构建教学内容。将原有的食品微生物、食品微生物实验、食品微生物检验进行分解，找出其中与从事食品微生物检验工作相关的理论知识、方法技能、职业素质进行重新整合，并结合食品卫生微生物检验国家标准及国家职业标准中级、高级食品检验工的内容，按照基于工作过程的教学做一体化的理念，形成工学结合的教学项目，从而实现培养食品微生物检验职业技术能力的目标[3]。

4 课程内容与教学设计

为使学生掌握食品微生物检验的知识与技能，课程设置食品微生物及检验基础知识，食品微生物检验室使用与管理，微生物检验基础技能训练，食品卫生细菌学检验技术，真菌学检验技术，食品中常见病原微生物检验技术，其他微生物检验技术，食品微生物检验综合实训总共8个学习项目，每个教学项目下设若干个工作任务，采用教、学、做一体化教学。课程教学内容设置见表1。

5 教学实施

教学建议 要体现本课程在教学方法上的特殊性，强调工学结合，不再严格区分理论与实践教学，将理论知识融入实训教学内容。

本课程主要采用教、学、做一w化的教学模式，以项目为导向，以任务驱动的方式进行。在教学中也可采用以培养能力为主的多种教学方法（讲授式、学导式、讨论式、启发式、诱导式）进行教学。

1）采用教师讲授与课堂讨论相结合、理论课与实训课相结合的一体化教学，以工作过程为导向的教学，以工作任务为载体导入检验项目，学生自学与辅导答疑相结合，达到提高学生综合素质之目的。

2）理论课采用多媒体课件、教学视频等教学手段上课。

3）利用网络资源库教学，编制纸质教材、实训指导书、电子教材（电子教案、多媒体课件、习题库）及网络教材（网络课程资料、网上学习指导、在线测试）于一体的立体教材，学生可以通过网络学习、测试。

教学基本条件

1）对专业教师要求：具备讲师（工程师）及以上职称或研究生以上学历，具备教师资格，具有高级检验工以上职业资格证书，有扎实的食品微生物检验相关理论基础，熟悉微生物检验相关国家/国际标准；熟练掌握微生物检验各项操作技能，具备食品检验的基本理论与操作技能，具有检验质量控制的基本知识；具备微生物检验岗位2年以上实践工作经验，能针对实际教学条件进行相应教学设计。

2）对实训室要求：要有微生物检验常用设备，如无菌

室、超净工作台、高压灭菌锅、培养箱，合理配置检验室仪器设备、存放样品的台面及冰箱，具备16个微生物检验工位。

3）对教学场所要求：要有多媒体教学设备、黑板，要求一次性能容纳60人以上。

课程资源的开发与利用 包括相关教辅材料、实训指导手册、信息技术应用、工学结合、网络资源、仿真软件等。

1）利用理实一体化教学平台，采用多媒体课件教学。

2）开辟空中课堂，实现网络教学资源全面共享，充分利用国家精品课程资源，提供与课堂教学相关的教案、电子教材、习题与解答、实训项目设计、试卷与答案、多媒体课件等。

3）开发课程网站，学生可通过课程网站自主学习。教师和学生可以通过课程网站，对某一内容有目的地开展分析讨论与交流协作活动，加深对问题的理解，从而获得高级认知能力。

6 教学评价

考核方式 考核方式分为过程性考核和终结性考核两部分。

1）过程性考核。

①平时成绩：出勤情况；课堂纪律；上课表现（是否积极参与课堂讨论）；课堂提问（是否能主动回答问题以及回答问题结果）。

②项目完成情况：实训室表现（能否遵守实训室规章制度，能否正确使用各种仪器设备，实验后是否及时清扫）；实践操作能力（态度是否积极；是否参加动手操作；操作是否规范；步骤是否合理）；方案设计能力（是否能够根据资料合理设计方案、安排时间；是否具有自我学习及创新能力）；信息处理能力（是否能够根据现象得出结论；数据分析是否合理）；项目报告书写能力（是否独立完成；书写是否规范；数据是否真实；是否有判读分析）；团结合作能力（实训中是否能够通力合作、分工明确；是否保证检测结果准确）。

2）终结性考核。理论考试及聘请企业具备理化检测能力的技术人员，按照企业岗位人员的工作要求进行实操考核。

评定标准

1）平时成绩（10%）：出勤情况及课堂纪律5%+上课表现及课堂提问5%。

2）项目完成情况（50%）：实训室表现10%+实践操作及设计10%+数据处理分析10%+项目报告10%+小组合作10%。

3）终结性考核占40%。各工作任务成绩分配见表2。

7 结语

以工学结合为切入点，打破微生物学科体系，按照食品检验岗位及微生物检验职业标准，针对高技能人才知识、技能、素养需求，以及食品微生物检验的国家标准，选择实训项目及理论知识，实现学生在校学习内容和未来实际工作一致，缩短学生从学校到企业的适应期，为学生的就业打下坚实的基础，提高教学质量，增强教学效果[4]，把学生培养成为专业技能、职业道德与综合能力兼具的创新型人才[5]。■

参考文献

[1]王华.高职食品微生物学教学方法及考核方式的改革初探研究[J].现代食品科技，2007，23（2）：83-85.

[2]王瑞兰，苏新国，王尔茂.高职食品类专业课程建设与教学改革：以“食品微生物检验技术”为例[J].当代教育理论与实践，2010，2（2）：36-37.

微生物学及检验技术例4

在诸多领域的工作中都涉及微生物检验环节，如食品、药品等的检验，对保障相关产品的质量具有重要作用。微生物检验也是实验室检测的重要手段，根据检测需要和实际情况采取相应的微生物检验手段能更好地提升微生物检验效果与水平，这就需要相关人员不断深入研究微生物检验技术，把握好微生物检验的发展趋势，使其在相关工作中得到更好的应用。

1、 微生物检验技术概述

微生物检验主要是对部分产品（一般是口服的食品、药品）中的微生物污染开展定性或者定量检验的技术。该技术涉及诸多领域与行业，如食品、饮用水、外用或口服的药品、需灭菌的产品和化妆品等，此类产品卫生标准有明确的规定，通过微生物检验技术对其微生物污染实现严格控制，避免各类有害病原微生物侵入人体而对广大消费者的健康造成危害。在微生物的常规检验中，主要的测定内容有需氧菌的总数、霉菌的总数、肠道的致病菌、化脓性的致病菌、食物的中毒菌、破伤风的厌氧菌、活螨虫和螨虫卵以及大肠菌群等。在微生物检验中，一定要严格执行检验的程序，在样品检验前一定要对操作的环境提前采取灭菌处理，操作期间谨防出现二次污染[1]。

在微生物检验中，基本操作有接种、分离纯化、培养、鉴定和保存等。在接种方面，常用的方法有划线接种、三点接种、穿刺接种、浇混接种、涂布接种、液体接种、注射接种、活体接种等。对培养基完成高压灭菌后，通过已灭菌处理的工具在无菌条件下进行含菌材料向培养基上接种。在分离纯化方面，若一个菌落内的所有细胞都来自一个亲代细胞，此菌落就被称作纯培养。在鉴定菌种时，用到的微生物要求是纯培养物，而纯培养物的获取就是分离纯化的过程，方法也有很多，如倾注平板、涂布平板、平板划线、富集培养、厌氧处理、单细胞分离等。在培养方面，以培养时对氧气的需求情况为标准，可以分为好氧培养、厌氧培养；以培养基的物理状态为标准，可以分为固体培养、液体培养。在鉴定方面，主要涉及形态学的观察、生理生化的试验、化学成分的分析、基因型的分析、系统发育的分析等内容。在保存方面，基本原理是挑选优良的纯培养物，使其处于休眠状态，然后人为创造有利于其休眠的环境，使其在长期保存后依然具备菌种原有的优良特性[2]。比较常用的方法有定期移植方法、液体石蜡方法、真空冷冻干燥法、低温冻结方法等。

2、 基因检测在微生物鉴定中的应用进展

在微生物鉴定中，基因检测是一种新技术，目前已经研究出下一代测序（Next Generation Sequencing,NGS），此方法主要是对大量DNA的小片段进行检测，通过特定算法对个体检测的数据与参考基因的序列实施对比，发现可能存在的变异情况。以医学临床中的微生物检验为例，NGS可以用于感染性疾病病原体的鉴定。对病原微生物的传统鉴定方法主要包括涂片镜检处理、分离培养、质谱和生化反应等，但此类方法呈现出周期长、灵敏度低和过程复杂等缺点，对分枝杆菌的菌种鉴定用时需30～40 d，对苛养菌、病毒等的培养条件也极为苛刻，大大增加了培养的难度。分子诊断基于聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）有效解决了上述病原体的鉴定问题，但不能解决未知的微生物检验难题，因为未知的微生物核酸序列也未知，无法设计引物，这也成为该技术最大的难题[3]。在NGS检测中，不需要对病原体实施分离培养处理，也不依赖已知的核酸序列，能直接实现标本的测序、鉴别，有效节省了检测时间、提升了诊断效率，在对未知物种和难培养病原体的鉴定中具有显着的优势。在对病原体的鉴定中，NGS的应用主要包括两种方法，分别是r RNA基因测序、全基因组测序（Whole Genome Sequencing,WGS）。其中，r RNA基因测序法在临床上主要用于细菌和真菌等鉴定，也是菌群分析环节的基础；WGS和r RNA基因测序方法相比，WGS能获取更加全面的信息，适合在病毒的鉴定中使用。大部分的病毒是不可培养的，且存在高度变异的情况，NGS和基因芯片、Sanger测序法等相比，NGS具有更高的效率，也不需要设计特定探针，适用于复杂的临床标本病毒鉴定。

3 、微生物鉴定技术的研究进展

微生物鉴定的定义是以现有的分类系统对未知微生物的特征实施测定，以对其实施细菌、霉菌和酵母菌等大类区分，或对属、种和菌株水平进行确定的过程。在鉴定污染微生物时，一般结合鉴定的水平合理选择鉴定的方法。在微生物的鉴定中，传统方法（经典的生化反应、革兰氏染色的显微镜鉴别等）一般适用于大多数非无菌类药品的生产以及部分无菌生产环境中的风险评估。但在药品的微生物污染相关事件中，通过传统的方法并不能满足快速分型、准确鉴定和溯源分析等需求，所以，研究分子生物学时产生的基因型鉴定法逐渐得到应用[4]。

采用传统技术鉴定表型主要包括菌落形态的观察、染色、生化鉴定、显微镜检查等环节，呈现出成本低和便于操作等优点。但微生物表型存在一定的可变性，不同的生长环境会对其表观形态产生影响，如不同培养基内的微生物可能有不同的颜色。同时，传统表型鉴定技术对人员经验和培养条件较为依赖，在一些生长缓慢、培养难度大、需特殊营养的微生物鉴定中具有很大的局限性。随着社会的发展，现代化的微生物鉴定技术逐渐在药品污染的微生物鉴定、溯源分析以及污染调查等方面得到广泛运用，此类技术实现了对传统表型鉴定的拓展与丰富，如生化鉴定系统（如VITEK和API的系统）、FTIR（傅里叶红外光谱）、MALDI-TOF-MS（基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱）、以碳源分析为基础的全自动化微生物鉴定系统、脂肪酸鉴定系统等，有效提升了微生物的鉴定效率和药品质量的控制水平。

随着鉴定技术的发展，基因型鉴定技术被研发出来，这是一种以微生物的基因序列为基础，对其分子实施生物学鉴定的技术，不依赖微生物的培养，是一种现代化的鉴定技术类型。基因型鉴定技术和表型鉴定技术存在很大不同，其数据库较为完善，能以微生物的遗传物质为基础，通过差异分析对微生物进行鉴定，呈现出高效率、高准确度和高通量等特点。在自然环境中，约有10%的物种能以分离培养的方法获取，以微生物的培养为基础的传统表型鉴定具有很大的应用局限性，而采用基因型鉴定，以16S r RNA的高通量式测序法获取的微生物群落信息就十分全面。当然，基因型鉴定也有一定的缺陷，使用16S r RNA法时，不能对某些亲缘较近、不明显的特征序列类微生物进行准确鉴定；采用高通量的测序分析混合样本时，不能有效排除已死亡的微生物干扰因素等[5]。

4、 微生物检验技术的发展趋势

在微生物检验技术的发展过程中，逐渐产生了很多技术类型，各有优缺点。为了有效地弥补各检验方式的缺陷，可以对多种方式实现联合运用。在选择检验方式时，需要综合考虑相应条件，特别是检验中对灵敏度的要求。因此，提升灵敏度、消除假阳性是检验技术研究过程中的重要关注内容。在计算机技术迅速发展的背景下，微生物检验技术朝着高度自动化以及简便快速的方向发展。目前，分子生物学相关技术在自动化的仪器联合中，已经被运用于病原菌的诊断和鉴定、耐药基因的检测等方面。要想实现高质、高效和价格低廉等有效统一，就要改变临床中病原菌的检验现状以及传统观念，在各学科的交叉发展中，新型检验技术也会越来越多。

近年来，新型技术得到了迅速发展，如电化学和比浊法等技术，可以对药品内的活微生物实现直接测定；固相细胞的计数法以及流式细胞的计数法等，能分析微生物细胞内的特定成分。上述技术能提高药品检测的准确性，也能保证检测人员的安全，因此，应用前景十分广阔。基于技术的迅速发展，要想实现药品中微生物检验的进步，还要完善检验标准，提升相关检验人员的综合素质和专业水平。因为药品检验期间需要人工操作，操作人员的技术水平会对检测结果产生直接影响。为了提升操作人员的技术水平，要对检测人员开展定期培训。目前，在药品微生物的检验中，软硬件设备都得到了显着改善，且药品的微生物检验技术也朝着标准化方向发展，特别是对无菌制剂的研究已取得显着成就，推动着检验项目和方法、药典制定的依据等朝着更科学的方向发展[6]。

5 、结语

微生物的检验在诸多领域得到了应用，也逐渐产生了很多检验技术和方法，各有优点与不足。为了促进相关技术作用的充分发挥，还需要对检验技术不断进行研究，把握好检验技术的发展趋势，推动检验技术的现代化发展。

参考文献

[1]白梅临床微生物检验的快速诊断技术研究进展[J]家庭医药，2018(7):59.

[2]李茂峰.食品微生物快速检测技术及其自动化研究进展[J].食品安全导刊, 2017(18):120.

[3]王颖临床微生物快速检验技术研究进展[J]医药前沿, 2017(23):6-7.

微生物学及检验技术例5

【中图分类号】TS201.6【文献标识码】A【文章编号】1672-3783(2012)02-0055-01

随着近几年抗生素的滥用，导致了出现大量严重的耐药菌株，加上新的病原微生物的出现，给临床诊断和治疗带来了极大的困扰。严峻的现实给病原微生物的检测和诊断提出了更高的要求。世界卫生组织（WHO）对临床微生物实验室提出：临床微生物实验室尽可能把目标集中在快速诊断方面。传统的微生物检验法最突出的弱点是慢，难以实现快速诊断与治疗，已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。实现更准确、更快速的检出与监测病原体成为目前临床微生物检验亟待解决的问题。随着各种生物学技术的发展和相关学科的不断发展，特别是免疫学、生物化学、分子生物学及计算机技术的持续发展，微生物的检验速度明显加快，同时明显提高了微生物的诊断水平。笔者对近年来微生物的快速检验技术研究进展现状作了一些探索，现在综述如下。

1免疫学方法在快速检测微生物抗原或抗体中的应用

免疫学技术是利用特异性抗原抗体反应，检测病原微生物，简化了病原微生物的鉴定步骤，备受关注。该方法已成为一种微生物实验室常用的成熟的快速检测技术。

应用单克隆抗体结合各种形式的放射免疫分析、酶免疫分析、荧光免疫分析、时间分辨荧光免疫分析、化学发光免疫分析、生物发光免疫分析等，足以检出临床标本中痕量微生物抗原，免去细菌或病毒培养过程，直接完成微生物感染的快速诊断。如抗血清凝集技术、荧光抗体检测技术、协同凝集试验、酶联免疫测试技术等。这些方法操作简单，已经被广泛应用于细菌的分型和鉴定，如沙门菌、霍乱弧菌、流感嗜血杆菌及隐球菌，短时间内就可完成鉴定。其中，应用酶联免疫技术制造的全自动免疫分析仪，使该技术进一步简化和准确。许多疾病的检测都已有商品化的试剂盒出现。

2分子生物学技术在快速检测微生物中的应用

随着分子生物学技术的迅速发展，对病原微生物的鉴定已不再局限于外部形态结构及生理特性等一般检验上，而是立足于分子，特别是核酸水平的检测上，使人们对微生物的认识从外部表型逐渐转向内部基因结构特征，微生物的检测也从生化、免疫方法转向基因水平检测。在此基础上建立的众多检测技术中，核酸杂交和聚合酶链反应（PCR）以其敏感、特异、快速等特点已应用于病原菌的快速检测。特别是基因芯片技术的兴起，其具有样品需求量少、检测效率高等优点给微生物学检测带来新的革命。同时，随着病原微生物的耐药性问题的日益严重，有的细菌甚至出现多重耐药，基因芯片可实现检测耐药菌的耐药基因，可有针对性地使用抗生素，从而提高疗效，对临床用药和新药开发具有指导意义。但目前基因芯片技术还有一些关键问题有待解决，如芯片的特异性、敏感性和成本等级大限制了该技术在临床病原微生物检测中的应用。

3细菌专有酶及其代谢产物在快速检测微生物中的应用

快速酶触反应是根据细菌在其生长繁殖过程中可合成和释放某些特异性的酶，按酶的特性选用相应的底物和指示剂，并将他们配制在相关的培养基中，根据细菌反应后出现的明显的颜色变化，确定待分离的可疑菌株，反应的测定结果有助于细菌的快速诊断。这种技术将传统的细菌分离与生化反应有机的结合起来，并使得检测结果直观，正成为今后微生物快速检测发展的一个主要发展方向。

4细菌毒素在快速检测微生物中的应用

从临床标本中直接检出细菌的毒素，常比细菌培养更可靠。如难辩梭菌在正常肠道中也可出现，故对抗生素相关性肠炎的诊断，检出其毒素比细菌培养更有意义。目前，英国Unipaih公司已研制出VTEC的PRLA乳胶凝集试剂分别检查VT－1与VT－2，试验时以多粘菌素裂解菌体，释出VT，与乳胶试剂在U形板中温育24h，肉眼判定有无凝集。金黄色葡萄球产生的多种肠毒素也可用单抗的协同凝集试验迅速检出，是诊断该菌致成的食物中毒的可靠手段。

5分子生物传感器在快速检测微生物中的应用

分子生物传感器是将新兴的传感器技术和分子诊断技术相结合而成的一种新技术，为现代临床诊断发展的一个新方向。生物传感器在感染类疾病诊断、药物筛选等领域获得了广泛的应用。其中临床中用于病原体检测的DNA生物传感器最为常见。据报道，最新制成的生物传感器，仅需20s时间即可检测出微量SARS病毒、天花病毒及炭疽杆菌等的存在，从而达到早期、快速诊断的目的。

6病原微生物的自动化系统在快速检测微生物中的应用

近年来，随着计算机技术的不断发展，对病原微生物的鉴定技术朝着微量化、系列化、自动化的方向发展，从而开辟了微生物检测与鉴定的新领域。最有代表性的是AMS微生物自动分析系统，可实现基本同常规检测鉴定，单检测所需时间4-8小时。

随着现代科学技术的不断发展，特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展，国内外学者不断推出新的微生物诊断技术和方法，建立了很多快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的微生物诊断方法，明显加快了微生物检验的速度和诊断水平，这为临床治疗提供了可靠的依据。

微生物学及检验技术例6

0 前言

微生物检验是食品分析检验的三大指标之一，与感官指标、理化指标一起构成了确保食品质量安全的重要内容。另一方面，采用人工方法对有益微生物进行培养，再将其广泛应用于食品工业生产具有很强的现实意义。《微生物检测技术》是我院食品生物技术专业（食品营养与监测方向）的一门专业基础课程，课程设计原则“以岗位需求和工作任务为导向，以职业技能鉴定标准为依据，模块项目对应微生物检验能力，基于工作过程创设学习情境”，对应于学生微生物分析、检验与培养能力的提高。

在《微生物检测技术》课程改革过程中，将课程培养目标与学生未来就业岗位相对接，把课程相关岗位能力分解为国家标准解读、样品采集处理、检测设备操作、样品规范检测、数据分析处理和规范书写报告六个方面，课程内容全面跟踪国家相关职业标准，根据岗位典型工作任务确定学习项目，项目教学的开展充分体现社会服务性，力争实现“工作”与“学习”的完美融合。

1 《微生物检测技术》课程内容改革

《微生物检测技术》课程主要分为三级学习模块，分别是基础能力模块、应用能力模块和综合能力模块，在每级模块中分别设计了学习项目。其中，基础能力模块包括微生物检验基础、微生物形态结构和微生物生理特性三个项目，应用能力模块包括培养基配制技术、消毒灭菌技术、分离纯化与培养技术、显微镜观察与计数技术和菌种保藏技术五个项目，综合能力模块包括食品微生物检验、化妆品微生物检验、药品微生物检验和环境微生物检验四个项目。在综合能力模块的学习中，食品微生物检验项目是重点内容，结合食品生物技术专业特点和地方企业资源优势，设计了四个学习情境，分别是扒鸡微生物检验（扒鸡是德州禹城特产，该学习情境的选取对应于禹城市傻小二扒鸡有限公司的需求）、牛奶微生物检验（该学习情境的选取对应于东君乳业有限公司的需求）、调味料微生物检验（禹城市是“中国食品馅料城”，该学习情境的选取对应于鸿兴源食品有限公司的需求）、功能糖微生物检验（禹城市是“中国功能糖城”，该学习情境的选取对应于保龄宝生物股份有限公司、山东龙力生物科技股份有限公司、福田药业有限公司的需求）。学习情境与企业需求直接对应，充分体现了高职人才培养要服务区域经济和社会发展的要求。化妆品微生物检验、药品微生物检验和环境微生物检验项目则根据日常生活常见产品类型分别设计了洗面奶微生物检验、止咳糖浆微生物检验、水样和空气微生物检验学习情境。

2 《微生物检测技术》教学方法改革

教学过程中，根据不同学习内容的特点采用不同的教学方法，主要有工作实境教学法、项目任务驱动教学法、以考促学教学法等。

2.1 工作实境教学法

《微生物检测技术》课程实践性很强，实验课时达到50%以上。实验课程授课过程中，采用工作实境教学法，将实验教学流程与岗位工作流程相对应。其中，岗位工作流程有：承接项目――方法查询――确定方法――实验准备――分析检测――检验报告――报告审核――意见反馈；实验教学流程有：承接任务――方法查询――确定方法――实验准备――样品处理――分析检测――检验报告――汇报交流。通过实验教学流程与岗位工作流程的对接，增强了学生的岗位能力，为将来更快更好地适应工作岗位要求奠定基础。

2.2 项目任务驱动教学法

采用项目任务驱动教学法，承接企业的实际产品微生物检验项目，在项目任务的驱动下开展教学过程。下面以扒鸡微生物检验为例介绍项目任务驱动教学法的运用。

先承接禹城市傻小二扒鸡有限公司的扒鸡微生物检验任务，再进行方法查询，确定运用中华人民共和国《食品卫生微生物学检验》国家标准检测扒鸡菌落总数、大肠菌群和致病菌（主要是沙门氏菌）三项指标。按照检验前准备――样品采集与送检――样品预处理――样品检验――结果报告五个步骤完成检验任务，期间综合运用到培养基选择、配制和灭菌技术，微生物接种技术和微生物计数技术等，还会使用到高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱等设备，对学生综合实践水平的提高起到了极大的促进作用。

2.3 以考促学教学法

采用以考促学教学法，课程考核包括过程考核和期末考试，并融入激励机制和社会评价，增强学生的学习积极性和自律性，进而提高教学效果。具体考核方案如下：过程考核占40%，其中出勤及纪律情况占6%，作业完成情况占4%，实验实训完成情况占20%，实验实训报告占5%，社会服务占5%（社会服务项目包括：督查学院餐厅、超市食品卫生质量，利用课余时间为校企合作单位提供样品微生物检测服务等）；期末考试占60%，其中理论知识考核占40%，技能考核占20%。另外，学生若在社会服务过程中表现优异，获得相关单位的好评，还可以额外获得10分甚至更高的奖励。通过融入激励机制，大大激发了学生参与社会服务的热情，不但有助于提高学院的社会赞誉度，还为学生创造了更多接触社会、接触微生物分析与检验实战环境的机会，教学效果良好。

3 教学成果与课程特色

3.1 教学成果

（1）学生们通过《微生物检测技术》课程的学习，能够利用不同类型的微生物完成发酵食品的制作。截至目前，学生们已经成功制作了发酵香肠、泡菜、酸奶、葡萄酒等发酵食品，实现了由单纯的微生物分析与检验向微生物综合利用的转变。

（2）将社会服务融入课程考核，为学生和用人单位提前搭建沟通桥梁。部分学生在为校企合作单位提供样品微生物检测服务时表现优异，提前被企业看中，签订就业预约协议，一毕业便顺利就业，并直接走上检验技术岗位。

3.2 课程特色

（1）以体现地方特色产品的检验为课程项目内容，将学习和工作充分融合的同时，也为地方经济发展服务。

微生物学及检验技术例7

一、食品微生物学检验检测体系概述

（一）、食品微生物学的概念

食品微生物学是微生物学的分支学科。它是自工业微生物学、微生物生态学和卫生学中专化出来的一门学科，主要研究微生物与食品制造、保藏等方面的内容。食品微生物学涉及病毒、细菌、真菌多种微生物，除研究这些微生物的一般生物学特性外，还探讨它们与食品有关的特性。微生物作为最简单的生命体而成为生命科学研究不可替代的基本材料，由此也奠定了食品微生物学在微生物学中的地位。使得食品微生物学也成为食品制造领域里十分活跃的一门新型学科。

（二）、食品微生物学检验检测体系的概念

食品微生物检验体系的发展是与整个微生物学的发展是分不开的，食品微生物学检验检测体系是运用食品微生物学的理论与技术，研究食品中微生物的种类，根据食品卫生的微生物学标准，对食品微生物实施检验的一系列有序的检验工序。它涉及生物学、生物化学、发酵学等多门学科的知识。《中华人民共和国国家标准——食品卫生检验方法》是食品微生物检验检测体系的检验依据，确保微生物食品的安全、卫生。对于人类食品安全健康起着重要的作用。

二、食品微生物检验检测体系存在的问题

我国食品微生物学检验检测体系主要问题可分为以下几个方面：

（一）、食品微生物检验检测范围广

由于食品种类繁多，分布不同。而且微生物的种类也非常多，数量巨大。如目前列入食品卫生国家标准的致病菌有13种，每种的检验方法的复杂繁琐。在食品来源、加工、运输等过程中都有可能受到各种微生物的污染。正是由于检验检测范围广，导致着微生物的危害度、食品的特性及处理条件无法贯彻落实，食品存在着严重的卫生质量问题。

（二）、我国食品微生物检验机构监管不严

无有效地监管机构，导致食品微生物检测无法贯彻执行，于是时有发生检验检测效率低下。无监管的情况下，因人为事务而遭受重大食品安全问题。而对于我国食品微生物检验机构监管不严的现象尤为突出。食品卫生监督机构：各级卫生局下属 卫生监督所不能有效保证其工作质量，食品加工企业自检不严格都将导致严重安全隐患。为加强检验机构控制监督管理，更好地依条例履行检验机构条例依据职责，有效的检验机构，必不可少。

三、食品微生物检验检测体系的完善

为了防止微生物引起食品变质、腐坏，减少传染病是病菌随食品进入体内并在人体内增殖。食品微生物检验检测体系是否有效已经成为食品安全的关键问题。于是如何完善施食品微生物学检验检测体系，已是一项十分严峻的考验。根据分析，得出如下几条建议：

（一）明确食品微生物检验目标

在检验中，了解检验目标，有利于对于检验全局的控制得到有效化。食品微生物的检验目标是：研究各类食品中微生物种类、分布及其特性；研究食品的微生物污染及其控制，提高食品的卫生质量；研究微生物与食品保藏的关系；研究食品中的致病性、中毒性、致腐性微生物；研究各类食品中微生物的检验方法及标准。只有准确地明确目标，才能将食品微生物学检验检测体系的优越性充分发挥出来。

（二）、提高微生物检验检测的技术规范

食品生产是一个时间长、环节多的复杂过程。与每一个步骤都有可能产生微生物的污染。食品有直接和间接关系的致病性微生物都可能污染食品。在检测检验过程中，良好的技术操作有利于提高微生物检验检测体系的完整性与安全性。其包括显微镜检、染色技术、培养基制备技术、接种、分离纯化和培养技术等。能有效地将检验操作技术规范化，是一项不容忽视的课题，也是食品微生物检验检测体系的技术保障。

（三）提高政府对于食品微生物检验检测体系重视

食品微生物检验检测体系因受到政府的重视，只有在政府的支持下，才能在政治效益的监管下，提高检验检测体的健全。开发利用有益的微生物生产食品原料，如有机醇、有机酸、维生素类、核苷酸、氨基酸和医药类等，同时对引起食品腐败的微生物、引起食物中毒的微生物研究防止方法，快速科学的检测方法、修改卫生标准，完善卫生法规等。

四、结束语

生物学研究带来了技术、方法、思维和理论的大革命的同时，也为食品微生物带来了创新发展的原动力。食品微生物检验检测体系作为给人类提供有益于健康、能确保食用安全的食品的科学保障之一，已受到人们的重视，有着广阔的发展前景。而食品微生物检验检测体系的完善仍需各个技术、人员、制度的共同努力。

参考文献：

[1] 何国庆，丁立孝．食品微生物学．中国农业大学出版社，2009．

微生物学及检验技术例8

关键词：食品微生物检测快速检测技术

一、主要食品微生物快速检测技术

1 分子生物学技术

（1）PCR技术

通过大量复制目的菌的高度保守的一段或几段特异性DNA并确认这些DN段的大小来完成检测，如果样品中存在目的菌，就能复制出有关特异性DN段，而复制特异性DN段靠聚合酶链反应―PCR技术。

该技术已大量运用到食品微生物检测领域，并形成标准化，如SN/T 1632.2-2005《奶粉中阪崎肠杆菌检验方法 第3部分:荧光PCR方法》、DIN 10135:1999《沙门氏菌聚合酶连锁反应（PCR）检验方法、ISO 20837:2006《食品和动物饲料微生物学―聚合酶链反应（PCR）检测食源病原体―定性检测用样品的制备》

目前利用PCR技术检测病原菌的商品化仪器有被AOAC、USDA-FSIS、Health Canada、AFNOR等权威机构认可的BAX@全自动病原菌检测系统，可检测沙门氏菌、大肠杆菌O157、单增李斯特菌等致病菌，此外还有RiboPrinter@微生物鉴定系统，可鉴定沙门氏菌、大肠杆菌O157、单增李斯特菌和阪崎肠杆菌等致病菌在内的1400多种细菌。

在1996年由美国AB公司推出的实时荧光定量PCR仪，与常规PCR仪相比，它具有特异性更强、有效解决PCR产物污染、自动化程度高，同时能对起始模板进行准确定量等特点。

（2）核酸探针技术

核酸探针是指带有标记的特异DN段。根据碱基互补原则，核酸探针能特异性地与目的DNA杂交，最后用特定的方法测定标记物。探针标记方式为放射性标记、非放射性标记，具有直观、准确等特点，基于核酸探针杂交的基因芯片技术，虽然其灵敏度与PCR技术相当，但其具有高通量、多参数、高精确度和快速分析等特征，所以备受青睐。我国已将此技术引入到行业标准中来，如SN/T 1543-2005《食源性致病菌基因芯片鉴定方法》。

2 免疫学技术

（1）荧光抗体法

用荧光物质标记抗血清的抗体，即抗抗体。使用荧光显微镜观察样品中的目的菌-荧光标记抗体结合物或目的菌-抗体-荧光标记抗抗体结合物来判断结果。在食品微生物检测领域内，国内使用的较多是mini-VIDAS全自动荧光酶标免疫测试系统，该系统已被AOAC、AFNOR等权威机构认可，可检验沙门氏菌、单增李斯特氏菌、大肠杆菌O157、葡萄球菌肠毒素等。

（2）免疫酶技术

以酶标记抗体或抗抗体，抗原与酶标记抗体，或抗原-抗抗结合物与酶标记抗抗体特异性结合。根据酶反应有色反应的有无及其浓度，即可间接推测被检抗原或抗体是否存在及其数量。常用酶技术分为固相免疫酶测定技术、免疫酶定位技术和免疫酶沉淀技术。在食品微生物检验领域内，国内使用比较多的有Reveal@大肠杆菌O157：H7检测系统、Reveal@沙门氏菌检测系统及GeneQuence@李斯特氏菌检测试剂盒、金黄色葡萄球菌乳胶凝集试剂盒等。

（3）免疫磁珠技术

用连接抗体的磁珠捕捉增菌液中的目的菌，然后将捕捉到的抗原即目的菌划线于选择性平板，观察菌落。或用荧光或酶标记的抗抗体进行检测。或用聚合酶链式反应技术进行进一步检测。此技术在ISO 166654:2001《食品和动物饲料微生物学―大肠杆菌O157基准检验方法》上得到了应用。目前可利用该技术对沙门氏菌、大肠杆菌0157、大肠杆菌0145、大肠杆菌O111等进行测试。

（4）免疫层析技术

该技术是一种膜固相免疫测定技术。滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用向另一端移动，犹如层析一般。移动过程中被分析物与固定于膜上某一区域的抗原或抗体结合而被固相化，无关物质则越过该区域而被分离，然后通过标记物的显色来判定实验结果。以胶体金为标记物的实验称为胶体金免疫层析技术，该技术具有简单、快速、准确和无污染等优点，可对食品中大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、布氏杆菌、霍乱弧菌等进行检测。

（5）其它免疫技术

细菌直接计数法主要包括流式细胞仪(flow cytometry，FCM)和固相细胞计数(solid phasecytometry，SPC)法。FCM通常以激光作为发光源，经过聚焦整形后的光束垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下产生散射光和激发荧光。光散射信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的强度则代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，由此可通过仪器检测散射光信号和荧光信号来估计微生物的大小、形状和数量。流式细胞计数具有高度的敏感性，可同时对目的菌进行定性和定量鉴定。目前已经建立了细菌总数、致病性沙门氏菌、大肠埃希氏菌等的FCM检验方法。

3.其它技术

即用型纸片法

3M公司的perrifilmTMPlate@系列微生物测试片，可分别检测菌落总数、大肠菌群计数、霉菌和酵母计数。由RCP Scientific Inc公司开发上市的Regdigel@系列，除上述项目外还有检测乳杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌的产品。3M公司生产的PF(Petrifilm)试纸还加入了染色剂、显色剂，增强了菌落的目视效果，而且避免了热琼脂法不适宜受损细菌恢复的缺陷。霉菌快速检验纸片，应用于食品检验中的霉菌具有操作简便，仅需36℃培养，不需要低温设备；快速，仅需2d就可观察结果，比现在的国家标准检验方法缩短3～5d，大大提高了工作效率。纸片法与国标法在霉菌检出率上差异无统计学意义，且菌落典型，易判定。

二、食品微生物快速检测技术的局限性

快速检测技术的评估结果表明，其对于某类食品的性能优于其他食品，很大程度上是由于食品成分干扰所致，有些食品成分对于快速检测方法中所应用的技术是比较麻烦的。例如在采用PCR技术时，食物中的高蛋白、高脂肪对Taq酶具有抑制作用，可能导致检测结果假阴性。同时PCR操作过程要求严格，微量的外源性DNA进入PCR后可以引起无限放大产生假阳性结果。

三、结束语

食品病原微生物检测是保障食品安全的重要组成部分，依靠采用培养基增菌培养、分离、生化鉴定及革兰染色镜检等传统检测方法，对实验室技术人员的专业技术、操作技能以及工作经验要求极高，操作步骤复杂繁琐，检测周期长，灵敏度低，准确性差，容易出现假阴性或假阳性结果。近年来，微生物快速检测技术发展迅速，运用分子生物学、电子技术、生物化学、免疫学等技术对微生物进行分离、鉴定和计数，与传统检测方法相比，更快、更方便、更灵敏、更准确。

随着某一快速检测技术更加频繁的使用，其好处与局限性同时变得更加明显，使用者在选择这些快速检测技术时，应考虑此技术的准确性、特异性、实用性、稳定性、灵敏度以及采用此技术的供应价格、认可程度和售后服务等因素，综合判别后进行选择。

参考文献：

［1］雷质文，等.食品微生物实验室质量管理手册[M].北京:中国标准出版社,2006.

微生物学及检验技术例9

(广西岑溪市疾病预防控制中心广西岑溪543200)【摘要】随着科技的发展和社会的进步，食品的生产与保存方法也在日益进步，但随之而来的食品安全问题也越来越不容忽视。食品检验，特别是食品微生物检验方法受到越来越多的关注，检验方法更是不断推陈出新。本文通过对不同食品微生物检验方法进行分析，从而探讨食品微生物检验方法未来的发展方向。【关键词】食品；微生物；检验方法【中图分类号】R155 【文献标识码】A【文章编号】1004-5511（2012）04-0669-01 据有有关单位统计，每年全球增加的腹泻病例达15亿个，由此造成的儿童死亡多达300万，其中约有70%是由于食用的食物或水中含有致病性微生物导致［1］。微生物污染造成的食源性疾病是世界食品安全中最突出的问题［2］。而随着科技的发展和社会的进步，人们对食物的要求也越来越高，单纯的味美已无法满足人们的需要，快速方便的食用方法，新奇的食材，离奇的生产方式成为消费者与商家追捧。由此伴随而来的食品安全问题也日益严重，传统的食品安全检查方法已不能满足需要，快速、可靠的食品微生物检验方法成为了学者们研究与讨论的重要课题。我国的食品卫生微生物指标以食品被有害菌污染的状况为标准，并规定了各类食品菌落总数、大肠菌群的限量以及不得检出致病菌的要求指标。但是随着食品行业新技术的发展、新方法的引入，食品中微生物的种类与以往大不相同，现用的检验方法无法检测到食品中的某些微生物，影响了对食品中微生物污染状况的客观评价［4］，由此也发展出各种新型食品微生物的检验方法。本文通过对各种不同的食品微生物检验方法予以分析，从而讨论食品微生物检验方法未来的发展方向。1、传统方法传统的食品微生物检验方法有：形态检查、细胞培养、生化试验、血清学分型、噬菌体分型、毒性试验及血清试管凝聚试验等［4］。这些检验方法检测结果灵敏可靠，但是受试验工作过程繁琐，检测需要大量人力、物力和财力等不利因素限制，在实际工作中已很少使用。2、酶触反应及代谢产物检测法酶触反应及代谢产物检测法是根据微生物生长过程中会产生特定活性酶或代谢物的原理，通过特定试剂检测其特定产物，从而确定食物中所含微生物的检验方法。根据此种方法制造的试剂盒使用十分方便、检测结果快速准确，如美国3MPetiffilmTM微生物检测试片可快速测定细菌总数及金黄色葡萄球菌等［5］。3、电阻抗法电阻抗法是应用微生物增长过程中会将培养基中的蛋白质、碳水化合物等电惰性物质代谢为乳酸盐、醋酸盐等具有电活性的小分子物质的特点，通过测试培养基导电性的变化，检测微生物的方法。这种新兴的生物技术近年来已经应用于细菌总数、大肠菌群、酵母菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等的检验［6］。4、分子生物学法核酸探针法，指将已知的特异DN段使用特定方法进行标记，利用碱基互补原则，特异DN段会与目的DNA杂交形成双联，通过检测特定标记测定微生物的检测方法。此种检测方法的DNA标记使检测变得直观、准确，例如用于检测沙门氏菌的AOAC990．1 3GENE．TRAK和用于李斯特氏菌的AoAC993．09GENE．TRAK。但是这种方法一种探针只能检测特定一种微生物，且检验样品需要培养时间，且其敏感度不高，因此在使用上有很大的局限性。聚合酶链式反应法，是在核酸探针法基础上发展出来的一种可以在体外进行DNA扩增的高特异性、高灵敏性、简便快捷的检测方法。这种方法于1983年，由美国Getus公司和加利福尼亚大学的Hulis和Erlich联合创建，利用将双链DNA进行高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步组成一个反应周期，循环反应，进而使靶DNA迅速扩增的原理，从而可以快速准确检验微生物。聚合酶链式反应法虽然需要配备特殊设备才能使用，但其具有特异性高、灵敏性强、简便快捷的检测特点，不仅可以用于食物中的微生物检验，还可用于疾病的诊断或任何存在DNA的检验，因此这一技术有着广泛的发展前景。5、免疫学方法酶联免疫吸附法，利用特定抗原或抗体受特异性反应酶催化作用而产生的微生物检测方法。这种方法的抗原或抗体遇到底物时会受特定反应酶催化产生出可用肉眼分辨或用仪器定性、定量的变化，从而确定微生物的种类。荧光抗体检测法，是在酶联免疫吸附法的基础上发展出来的，通过在特定抗原或抗体上标注荧光从而快速检测微生物的方法。此种方法简便、快速，但容易受到样本中非特异性荧光干扰，且荧光显微镜价格昂贵，不适合广泛使用。免疫磁珠分离法，指应用抗体包被的免疫磁珠，通过磁场装置从食品中分离特定微生物的方法。这种方法可以有效分离出样品中的少量微生物，并且避免了选择性培养基对特定微生物的抑制作用，检测数据快速、准确、有效。6、仪器法随着微生物检测方法的日新月异，越来越多的半自动或全自动仪器的发明与问世大大简化了检验工作，减少了检验中人力的投入，提高了检验的速度与准确性。如，Bactometer系统，由培养箱和分析器组成，通过培养箱培养微生物，检测培养基电阻抗、电容抗等相关指标，自动生成检验结果；流式细胞仪可以使微生物从悬液中快速分离，从而快速、定量检测微生物；免疫磁珠分离仪利用免疫磁珠分离法将特定微生物分离出来，从而方便检验检测；微型全自动荧光酶标分析仪利用酶联免疫荧光技术，具有无可比拟的敏感性和特异性；全自动微生物分析仪利用微生物鉴定和药敏试验方法，结合计算机技术，可以自动读取、打印鉴定结果；ATP生物发光仪利用生物发光法，可以在几分钟之内判断微生物种类和数量。7.结论随着科学研究与技术的发展，食品微生物的检验方法也将推陈出新，综合以上对各种检测方法的研究分析，笔者认为食品微生物检验应向分子生物学及免疫学方面发展，同时配合各种仪器的使用，今后食品微生物检验将全面自动化、标准化、高精准度化。参考文献［1］雷建晓.食品微生物检测技术应用［J］.投资与合作，2010（10）：133-134.［2］王云国，李怀燕．食品微生物检验内容及检测技术［J］．粮油食品科技，2010，(3)：40-43．［3］张代真.食品微生物检验方法问题探讨［J］.中国社区医师（医学专业），2011,13（23）：325-326［4］林文辉．浅谈食品微生物检测方法的进展［J］．医药与卫生，2010，(3)：295-296．［5］王英芳. 食品微生物检验内容与检测技术分析［J］.商品与质量 学术观察，2011,（7）：321-322.［6］ 张洁梅.食品微生物检验技术的研究进展［J］.现代食品科技，2005,21，（2）：221-222.

微生物学及检验技术例10

DOI：10.16640/ki.37-1222/t.2017.04.217

0 引言

微生物是肉眼看不见的微小生物，结构十分简单，一般情况下只有通过特殊设备才可以看到。微生物是一种非细胞生物，它包含的种类特别多，由于微生物极易存活，所以在食品加工中要严格监测加工环境，防止微生物滋生危害人体健康。食品微生物的检验技术能评价食品被微生物污染的状况，为食品安全监督和管理工作提供重要的科学依据，为了提高食品的卫生质量，保证人们的健康状况，食品微生物的检验刻不容缓。食品微生物的检验技术在我国已经成为常态，是食品安全监测中必不可少的环节，它的出现与发展为食品安全提供了保障，使消费者能够更放心的食用食品，为人们排除后顾之忧。本文旨在研究食品微生物的检验技术与未来发展，并就其现状展开深入探讨。

1 食品微生物检验技术应注意的问题

1.1 严格检验流程，树立无菌操作意识

食品微生物的检验事关食品安全，因此，为了保证消费者的生命安全，每一个食品微生物检验的过程和细节都要严格把控，防止因疏忽造成重大食品安全事故。食品微生物的检验看似是对食品中微生物含量和食品卫生的监测，其实更重要的是对进行这一操作的工作人员的严格要求。食品微生物实验室工作人员作为食品检验的主体，他们技术的高低直接影响食品的安全，因此，对工作人员的严格把关与要求是食品检测部门必须要做的事。食品微生物检验的工作人员要树立严格的无菌观念，因为工作人员一个小小的疏忽就可能使微生物有机可趁，造成食品污染。因此，在食品微生物检验过程中工作人员必须穿专用的工作服，工作前还应进行紫外线消毒，工作中的步骤也应严格执行规章制度，不得简化流程，以确保食品的卫生与质量。

1.2 保证食品检验的环境要求，记录归档

食品微生物检验必须在无菌环境中进行，因此，必须对无菌室进行严格管理，无菌室除了要保证采光好、避免潮湿以及远离污染区外，还应实行严格的登记及维修制度。工作人员在无菌室进行完微生物检验后，应将使用无菌室的时间、使用人和设备运行情况等进行记录，这样就可以最大程度降低食品安全事故的出现，因为一旦责任到人，每个人就会严格按照流程执行操作。这种记录归档的方式可以及时发现问题，以确保食品检验环境达到应有的标准。

1.3 食品微生物的检验需具备法律性质

食品微生物检验对样品的采集要求非常高，由于微生物具有存活率高、活动范围广、种类多的特点，这也就使得食品微生物的检验过程变得十分复杂。包括我国在内的世界各国都十分重视食品安全监测，食品微生物的检验技术要求较高，因此无论是检验部门还是检验人员必须要经过国家法律认可，符合国家法律规定，因为一旦脱离法律的束缚，食品安全就没有任何保障。食品微生物的检验人员必须要有职业资格证书，并且要有基本的法律意识，认识到其工作的特殊性与重要性。

2 食品微生物检验技术的发展

食品微生物检验技术的发展和应用已然成为一种趋势，越来越多的食品检验部门选择它足以见得它的优点，拥有如此庞大的群体，食品微生物检验技术的发展潜能不可估量，正所谓乘风破浪会有时，食品安全也会因为这一技术的发展而得到保障。既然食品微生物检验技术的市场前景如此广阔，那么国家和政府应该大力推广这一技术，并且出台相关政策推动支持这一技术的应用。此外，由于公民食品安全意识的不断增强，绿色食品逐渐成为人们的追求，食品微生物检验技术的运用可以完美的实现这一愿望，这一技术可以检测出食品中微生物的含量与种类，食品检验单位根据这一技术提供的数据进行安全监测，从而对食品的生产环节进行有效把关。食品微生物检验技术作为一种全新的技术已经成为我国食品安全监测单位追求的方向，只不过如何运用，怎样运用还需要在实践中不断揣摩，随着人们食品安全意识的树立与食品微生物检验技术的不断发展，未来二者的高度结合必将成为行业关注的热点。

3 小结

综上所述，在进行食品微生物检验时，工作人员既要考虑检验环境，又要保证检验流程的规范性，一切从食品安全角度出发，把消费者的切身利益放在首位，使消费者吃得安心。只有严格运行食品微生物检验技术，保证食品微生物含量在安全限度之内，食品安全才会逐渐上升到一个新的高度，我国的食品出口才会在世界各国中有强大的竞争力。

参考文献：

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[3]王富英.微生物检验技术实验教学存在的问题及对策[J].检验医学与临床，2009（07）.