自动化免疫分析例1

【关键词】化学发光免疫分析法;甲状腺激素

化学发光免疫分析法是20世纪80年代以来发展起来的一项新的标记免疫技术,在临床上有广泛的应用,包括内分泌激素、肿瘤标志物、血药浓度、传染病、心血管疾病标志物、贫血及过敏原等,特别是在甲状腺激素检测中应用更为广泛[1]。本文采用贝克曼全自动化学发光免疫分析仪检测T3、T4、FT3、FT4、TSH,对其方法学进行综合评价。

1 材料与方法

1.1 仪器贝克曼全自动化学发光免疫分析仪。

1.2 试剂发光试剂、质控品、标准品由贝克曼公司提供。

1.3 血清来源试验所需血清样本采自本院门诊和住院患者,每例取3ml血,离心3000 r/min,10分钟,取血清-70℃保存备用。

1.4 检测方法利用化学发光技术和磁性微粒分离技术相结合的测定方法,其反应原理与放免和酶免中的双抗夹心法、竞争法相似,严格按试剂盒操作说明书操作。

1.5 评价指标

1.5.1 批内精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三种浓度的血清样本,每种浓度同批平行测定10次,计算平均变异系数(CV)。

1.5.2 批间精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三种浓度的血清样本各10份,每天各测定1次,共测定10天,计算平均变异系数(CV)。

1.5.3回收率:由贝克曼公司提供原装3个浓度的标准品,分别测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,每个浓度平行测定3次,计算平均回收率。

1.5.4 线性范围收集患者血清标本,取T3、T4、FT3、FT4、TSH浓度高于厂家提供线性范围上限作为高值浓度水平(H),厂家提供稀释液作为低值浓度水平(L),用稀释液稀释高值浓度血清,形成如下系列浓度检测标本:1H+0L、4H+1L、3H+2L、2H+2L、2H+3L、1H+4L、0H+1L。用配制成的系列浓度标本平行测定各项指标含量,取平均值作图,取在坐标纸上呈明显直线趋势的各点值进行直线回归统计,取回归系数r大于0.9的浓度范围为可报告的浓度线性范围。

2 结 果

2.1 批内精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均变异系数分别为4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%。

2.2批间精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均变异系数分别为6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%。

2.3 回收率T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均回收率分别为96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%。

2.4 线性范围T3所测结果得到回归方程为y=1.069x-0.2468,r=0.9966,截距经t检验,ta=1.36,0.95,截距经t检验,ta=0.36,

3 讨 论

血清中三碘甲状原腺氨酸(T3)、四碘甲状原腺氨酸(T4)、游离三碘甲状原腺氨酸(FT3)、游离四碘甲状原腺氨酸(FT4)、促甲状腺激素(TSH)的测定对甲状腺疾病的诊断具有重要价值。以往国内实验室多采用RIA、MIRA检测血清甲状腺激素水平,此法虽较准确,仪器与试剂也较为低廉,但对操作人员水平要求较高,对实验条件及环境有较多要求,且随着标记抗原的放射性衰减,而使计数不稳定及曲线失真,导致结果偏离,结果重复性差,且可产生放射性污染[2,4]。

近年来发展起来的全自动化学发光免疫分析系统是利用化学发光技术和磁性微粒分离技术相结合的测定方法,其反应原理与放免和酶免中的双抗体夹心法、竞争法相似。其优点是[3,5]:(1)成熟的单克隆抗体技术或独特的磁性微粒子技术,保证了反应的高特异性;(2)检测范围宽,具有良好的稀释线性;(3)试剂稳定性好,不需酶促反应,有效期可长达半年;(4)操作简便,分析过程采用全自动化,减少了人工操作误差,重复性好;(5)试剂及标本均采用无吸附材料,故相互间的交叉污染率低,干扰因素少;(6)真正的随机连续检测,样本随到随测,具有急诊优先插入功能。因此全自动化学发光免疫分析系统是目前检测甲状腺激素等指标的较好方法。

【参考文献】

[1] 陶义训.免疫学和免疫学检验[M].第1版.北京:人民卫生出版社,1997:174.

[2] 叶任高,陆再英.内科学[M].第6版.北京:人民卫生出版社,2004:725.

自动化免疫分析例2

CYFRA21-l为细胞角蛋白的19片段，是一种酸性多肽物质，具有水溶性[1]。细胞角蛋白是一类构成上皮组织中间纤维亚单位的结构蛋白，目前人类已识别出20余种不同的细胞角蛋白多肽物质，因其在肺部有较多的分布，故十分适合作为肺部肿瘤的分化标记物。完整的细胞角蛋白多肽可溶性差，但可在血清中检测到其可溶性片段，细胞角蛋白19就是其中的一种，国内外学者研究发现其在肺癌的临床诊断中具有很大价值[2]。当肿瘤细胞死亡时激活蛋白酶加速了细胞角蛋白的降解，使血中含量显著升高，因而其成为检测非小细胞肺癌的重要标志物[3]。

CYFRA21-l与非小细胞肺癌之间关系已被广泛研究，相关检测设备也较多，本文基于Roche Cobas E601全自动电化学发光分析仪和Snibe MAGLUMI2000全自动化学发光分析仪检测发光原理的不同，前者是电化学发光，后者是直接化学发光；将两种系统检测结果进行比对，探讨两种系统测定血清CYFRA21-1的结果稳定性、可比性及相关性分析。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集来自九江市第一人民医院常规CYFRA21-1检测血液标本82份，离心后分别将血清标本分成两等份，立即用Roche Cobas E601全自动化学发光检测仪和Snibe MAGLUMI2000全自动化学发光仪同步进行检测。

1.2仪器与试剂 Roche Cobas E601全自动电化学发光检测仪，配套CYFRA21-1试剂盒，批号：11820966122；Snibe MAGLUMI2000全自动化学发光仪，配套CYFRA21-1试剂盒，批号：62140326。

1.3方法 以Roche Cobas E601全自动电化学发光分析系统CYFRA21-1试剂盒为参比，同时用两种系统测定82份血清标本CYFRA21-1，记录实验结果。Roche Cobas E601全自动化学发光检测仪利用免疫发光夹心法原理检测CYFRA21-1抗原；Snibe MAGLUMI2000全自动化学发光仪用免疫发光夹心法的原理检测CYFRA21-1抗原。

1.4统计分析方法 使用SPSS 18.0统计软件，对实验数据进行配对t检验处理，两种仪器检测结果行Pearson相关性分析。差异（%）=两组间检测结果差值/两组间检测结果均值×100%。

2 结果

2.1 Snibe MAGLUMI2000系统和 Roche Cobas E601系统分别检测82份血清CYFRA21-1的范围及结果见表1，组间比较见图1。

由表1和图1可知两种检测体系的结果在相同的生物参考区间利用配对t检验分析，无显著性差异，P>0.05。此外，两组间测定结果差异为6.2%，说明两套检测系统的一致性均较好。

2.2两种方法检测结果相关性分析 将Snibe MAGLUMI2000与Roche Cobas E601 CYFRA21-1检测结果行Pearson相关性分析，应用统计分析软件得出Snibe MAGLUMI2000与Roche Cobas E601检测值呈显著正相关，r=0.9795，P

3 讨论

检验结果目前已被临床医生认为是诊断治疗疾病和判断预后的有效手段。临床上为了避免不必要的医疗纠纷与事故，同一患者的检测项目应尽量使用同一分析系统进行检测。但目前各个医院检验科或不同临床检验实验室可能会使用不同厂家或型号的仪器来检测同一项目，因检测系统不同，导致所做的检验项目涉及的仪器、试剂、校准品、质控品、检验程序、保养计划等均有不同[4]。因而可比性和一致性对于这些检验结果来说就显得尤为重要。

同一实验室内，可以按不同的浓度交错检测覆盖整个检测线性范围的患者血清标本，尽可能的使检验结果更接近真实的状况，这样即可利于同一标本在不同检测系统所做结果的对比分析以及偏差评估等。不同检测系统的检验结果间是否具有可比性，还必须行临床可接受性能的相关评价研究，但目前国际上还没有临床可接受性能的统一判断标准。而临床要求是对患者样品检测结果具有可比性，而不仅仅是控制品或标准品，所以在进行比对的同时一定要注意基体效应的影响[5]。近年来，检验相关人员不断的在研究不同的检测系统对结果的影响[6]，以便检测结果更有助临床医生的诊断与治疗，同时也为实现不同检测系统、不同实验室的检测结果互认提供了相关依据。因此也为各同级医院之间检验结果的互认，避免患者的重复检查，节约社会医疗资源，减轻患者的经济负担做出了巨大贡献。

细胞角蛋白19在非小细胞肺癌诊断中有很大临床价值，市场上相关的检测仪器和方法也较多，检测结果的准确性和一致性越来越多地引起大家的关注。本研究共收集血清标本82例，通过本实验室的仪器Snibe MAGLUMI2000和Roche Cobas E601全自动化学发光分析仪分析系统的结果比较，发现两系统所测结果差异小，无统计学意义（P>0.05），相关性较好（0.9795，P

综上所述，Snibe MAGLUMI2000全自动化学发光分析仪显示出较好的性能特点，准确性高、一致性好，能满足临床实验室的需求。两种检测系统所测结果具有可比性，结果均可被接受。

参考文献：

[1]Buccheri G， Torchio P， Ferrigno D. Clinical equivalence of two cytokeratin markers in mon-small cell lung cancer： a study of tissue polypeptide antigen and cytokeratin 19 fragments [J].Chest， 2003， 124（2）：622-626.

[2]Duan X， Cui Y， Gong M， et al. Variations in Serum CEA and CYFRA21-1 Levels Before and After Surgery Facilitate Prognosis of Non-small Cell Lung Cancer Patients[J].Zhongguo Fei Ai Za Zhi，2015，18（6）：358-364.

[3]李湘荣，段小平.血清CEA与CYRA21-1检测对肺癌诊断价值的探讨[J].中国血液流变学杂志，2005，15（2）：278-279.

自动化免疫分析例3

现行临床免疫检验应用较多，特别是在肿瘤的发生、发展、复发及存活期期间，多依靠免疫检验帮助临床判断患者的当下情况，并未患者的治疗提供帮助。而在免疫检验自动化的发展过程中，也经历了诸多的变化，随着医疗设备的不断发展，免疫检验自动化也得到了巨大的进步，经过多年的研究，免疫检验自动化分析的操作步骤也在逐渐减少，检查报告结果更加准确详细，免疫检验已经从微量检测进一步发展为超微量检测[1]。而对免疫检验自动化进展总结分析，也具有较强的现实指导意义。

1免疫检验自动化的概念以及现状

1.1 临床免疫检验自动化的概念 免疫自动化检验指的是计算机控制检测仪器进行免疫检测分析，不需要人工操作。主要涉及三方面的工作：①加样品、分配试剂、以及洗涤和检测的自动化。②检测数据的自动化处理。③提示操作人员仪器出现故障以及解决办法[2]。

1.2现状分析 今年来临床免疫检验的工作量逐步增大，传染性疾病对检验人员的构成的风险不断加大，对检验工作的效率也提出了很高的要求，因此临床上免疫检验的自动化要求已经刻不容缓。自动生化分析技术在七十年代应用于临床检验实验室，经过二十年的发展，至九十年代免疫检验分析技术已经发展的越来越成熟，其中时间分辨荧光检测技术、化学发光检测技术等先进的分析技术不断的应用于临床免疫检验，这些检验技术灵敏度高、特异性好，抗干扰能力较强。

随着临床检验技术的不断发展，极大的促进了免疫检验技术的自动化的发展，很多自动化的分析仪应用于临床，大大降低了检验人员的工作强度，缩短了分析的流程，提高了检验结果的特异性以及准确性和灵敏度，所以自动化检验备受临床医学检验人员的青睐。

2临床免疫检验自动化的发展

2.1标记免疫检验技术的自动化发展 标记免疫指的是采用酶、放射性同位素等物质标记抗原或者抗体发生抗体、抗原反应。已经广泛应用于临床。由于其标记方法不尽相同，主要可以分为：放射免疫技术、酶标记技术、免疫荧光标记技术。其中临床检验中使用最广泛的是放射免疫技术和免疫荧光标记技术。但是两者都有明显的缺点，免疫荧光标记技术比较费时而且不能进行定量和自动化，放射免疫技术检测所需仪器复杂且价格昂贵，对人体危害比较大。酶标记技术则是一项易于操作的一项新技术，具有无需特殊设备、适用范围广泛、检测周期短等优点。

免疫标记检测技术主要具有两方面的优点：灵敏度高，测定目标由待测物转变为待测物上的微量标记物质，利用其放大效应，大大降低了待测物的检测下限，可进一步发展到超微量检测。特异性高，从传统的有机或者无机试剂发展为抗体和抗原，使得检测的特异性显著提高，随着酶试剂、稀土元素等更加灵敏、高效的标记物质的出现，免疫标记检测技术发展迅速，已经成为了临床免疫检验检测各种激素、肝炎抗体、肿瘤标记物等微量蛋白物质的主要检测分析手段[3]。

2.2 免疫浊度检测的发展

2.2.1 透射浊度检测法 免疫浊度的测定可以通过检测光源光路方向透射光的强度，分析其与测定溶液溶度的关系的方法。透射光的吸光度与待测定免疫物质的量呈现正相关，抗体量固定时，根据待测定免疫物质的吸光度，计算出相应抗原的量，这种方法的优点是只要试剂合适，在普通的生化分析仪上就可以进行全自动化的分析，可以使得人体液中的特异性蛋白质测定的准确度和灵敏度显著提高，检验流程更加简洁。

2.2.2散射浊度检测法 散射浊度检测法指的是波长一定的光照射溶液，当遇到抗原抗体复合物分子时，复合物颗粒导致光线折射，出现偏转，其偏转角度与光线波长以及复合物分子的大小和量有很大关系。光强度与抗原抗体复合物含量成正比，散射光强越强，那么形成的抗原抗体复合物也就越多。这种方法的优点是检测范围宽、检测速度快、敏感度高，但是要求所检测的抗体质量比较高。

3免疫检验自动化的总结

免疫检验自动化的主要技术参数主要有：临床检验中的抗体、抗原需具有高度的特异性和亲和力；检验中的固体载体一般为磁性微球，以达到增加免疫反应的面积的目的；自动化分析仪都要结合相关的计算机软件对测定的数据进行转化和分析。新的分析仪设计智能化程度不断提高，其自动化程度不断发展，已经成为了新时期临床免疫检验的最重要的检验方法之一。在不断的临床实践过程中，对临床免疫检验自动化的发展进行深入的研究。随着科学技术的不断进步，一些高灵敏度、高精确度的免疫检验技术将会广泛应用于临床，提高临床免疫学检验的效率，促使检验技术不断向着更高质量的方法发展。

参考文献：

自动化免疫分析例4

化学发光免疫分析是继荧光、放射性同位素和酶免疫分析之后发展起来的一项新的免疫分析技术，它具有灵敏度高、重复性好、准确、效期长并安全无污染等优点，成为取代放射免疫分析技术的首选。

CA19-9是一种低聚糖肿瘤相关抗原，在血清中以粘蛋白的形式存在，分子量大于5000KD，是Koprowski等应用人类结肠癌培养细胞株免疫BALB/C鼠而获得的19种抗体中的一种肿廇相关抗原[1]，可作为胃癌、肠癌、胰腺癌和肝癌等早期诊断和预后复查有着重要临床价值的指标。测定其浓度是对肿瘤活性的一种反映，且肿瘤标志物的出现往往比影像诊断早半年之多[2]。正常人血清中CA19-9水平很低，而胰腺癌中明显增高，阳性率高达90.7%，而肝癌的阳性率为72.5%[3]。Mitsuhashi等[4]还认为胰腺癌手术治疗的效果与血清CA19-9关系密切，如症状缓解血清CA19-9持续下降，病情恶化又继续增高，所以CA19-9是对胰腺疾病患者诊断、手术疗效的评定、术后病情和复发转移的有价值的肿瘤监测标志物。

1 材料与方法

1.1 检测对象 本院健康体检人员200例，男100例，女100例;年龄25～60岁，平均45岁。

1.2 方法 美国雅培公司的AXSYM全自动快速免疫分析系统:该系统综合使用了微粒子捕捉酶免疫分析技术(MEIA)、荧光偏振免疫分析技术(FPIA)，可测定激素、肿瘤标志物、肝炎、病毒标志物、维生素和各种治疗药物浓度等。i2000型全自动免疫分析仪及其配套的检测试剂是采用化学发光法进行检测，可用于超微量定量或定性测定人类血清。血浆、全血或其他各类体液中病毒抗原、抗体、激素、多肽、肿瘤蛋白等代谢产物的一套系统。

1.3 反应过程 一般在反应的第一阶段，标本与微粒以一定比例混合，标本中被检物质与微粒上包被的抗体进行一定时间的反应。第一反应终了后，利用磁场分离、吸去未反应的被检物质与其他的不要成分。

2 结果

200例健康体检人员均采用美国雅培公司的AXSYM全自动免疫分析仪和i2000型全自动免疫分析仪及其配套试剂分别检测血清CA19-9，结果均值分别39.30U/ml和69.05U/ml，差异有显著性。

3 讨论

CA19-9测定试剂盒由美国雅培公司提供，美国雅培公司的AXSYM全自动免疫分析仪采用微量子捕捉免疫发光技术(MEIA)，酶标抗体采用碱性磷酸酶作为标记物，碱性磷酸酶是一种最稳定的酶标记物，而基质液采用极稳定的4-甲基磷酸伞形酮。抗体包被采用微粒子技术，大大增加反应面积和提高特异性。待测CA19-9浓度与荧光发光强度成正比。

i2000型全自动免疫分析仪采用(CMIA)化学发光微粒子免疫分析是雅培公司的专利技术之一，主要用于测定蛋白质、病毒抗原等大分子物质。采用此方法生产的试剂具有极高的灵敏度、特异性和稳定性。试剂特点：抗原/抗体包被的微粒子：采用类磁颗粒，增加了反应的表面积，提高了反应的灵敏度，缩短了反应的时间，应用磁力吸附分离，冲洗彻底干净，提高了反应的特异性。标记抗体：采用专利技术的吖啶类(N-磺酰基)羧基氨基化合物作为标记物，由于其分子结构特性和增加的光自量，使得其在非竞争免疫分析模式中有极好的测试灵敏度和极宽的线性范围。更主要的是，此复合物所结合的特色硫磺丙烷基，提供了极佳的水溶性，使得背景噪音极大降低，从而检测灵敏度值大大提高。并且，该复合物还有极好的稳定性，有更长的试剂效期，极长的标准曲线保存和全面的极好的试剂表现。基质液：采用H2O2作为预激发液， 将吖啶酯从反应复合物中脱离下来，采用NaOH作为激发液， 吖啶酯在过氧化物和碱性溶液中发生氧化反应，这引起化学发光反应的发生。N-methylacridone形成并释放能量(光发射)，并返回到基态。

雅培所用的CA19-9检测试剂都使用相同的单克隆抗体。然而，在试剂的组成上存在着非常重要的差异。笔者认为就是这些差异造成了同一样品检测结果的不同。

差异之一在于i2000型全自动免疫分析仪上的ARCHITECT CA19-9试剂中的标记抗体使用F(Ab')2 抗体片断取代原有的完整分子抗体。抗体片段中所包含的结合位点与全分子一致，却减少了分子中会造成检测干扰及由于与血清蛋白非特异性结合而增加背景噪音的部分。使用ARCHITECT CA 19-9XR试剂进行检测，由于F(Ab')2抗体片断非特异性结合的减少会使背景信号降低，从而致使在检测范围低端的检测值会更低。

差异之二在于ARCHITECT CA19-9XR试剂中微粒子包被的抗体浓度获得优化，反应环境更趋于酸性。内部研究显示，ARCHITECT CA19-9XR中微粒子上包被的抗体数量与样品产生的信号量有直接关系。更酸化的反应环境及更优化的抗体包被微粒子会使得更多的抗原结合上微粒子。CA19-9抗原是一个拥有众多重复的抗原决定簇大分子糖蛋白。标记抗体由于使用了F(Ab')2抗体片断而非全分子，而变得更小，因此在当众多标记抗体分子与众多抗原决定簇发生结合反应时立体位阻就减小了。这种结合更多标记抗体的能力会使得具有大量抗原决定簇患者标本的检测值有显著上升。这也是造成方法学间对于同一标本的检测结果存在差异的主要原因。

标本中抗原的本质会引起方法学间不同的检测结果。CA19-9是一类复杂的异质性分子， 因此会在不同方法学的检测间获得不同的结果。胰腺癌细胞株中抗原的表达异常已有所报道，例如sialyl-Lewisa抗原会发生表达增强。如果标本中的细胞株具有大量的抗原决定簇的话，那么高值的检测结果就会因为试剂组成的差异而凸现出来。

因此i2000型全自动免疫分析仪采用(CMIA)化学发光微粒子免疫分析及其配套试剂较AXSYM全自动免疫分析仪采用微量子捕捉免疫发光技术(MEIA)具有更高的敏感性、特异性和稳定性，所以采用i2000全自动免疫分析仪及其配套试剂检测较AXSYM全自动免疫分析仪敏感性、特异性和稳定性高，对疾病的早期诊断具有更高的价值。

在使用i2000型全自动免疫分析仪采用ARCHITECT CA19-9XR 以连续监测时，实验室必须重新确立基线水平。37U/ml并非是一个绝对的截断值，大于或小于此值的检测结果并不意味着癌症的存在或者不存在。此检测应作为病情与治疗效果的长时间监测工具。

参考文献

1 潘中允.临床核医学. 北京：原子能出版社，1994，521-522.

自动化免疫分析例5

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.01.011

我国是乙肝病毒感染疫情严重的国家， 我国人口中约有1/10为乙肝病毒携带者[1]。乙肝病毒标志物是检测乙肝病毒感染的直接证据， 同时， 可通过监测乙肝病毒标志物观察患者病情、评价药物治疗效果。目前， 临床常用的乙肝病毒标志物监测的方法为酶联免疫吸附法， 随着化学发光酶免疫分析技术的不断发展， 其在检测上的应用也逐渐为人们所重视， 且在乙肝病毒标志物的检测中应用效果良好。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取本院传染科2013年1月～2014年1月门诊疑似乙型肝炎患者200例作为本次的研究对象。其中， 男108例， 女92例， 年龄19～68岁， 平均年龄（38.1±12.8）岁， 患者经基础检查， 无其他传染性疾病及肝脏器质性病变。

1. 2 方法 所有患者均空腹采用静脉采血方式， 抽取适量血液。室温下离心分离15 min， 分离血清以备检测。

1. 2. 1 仪器及试剂选择 化学发光酶免疫分析法选择实验仪器为郑州安图生物工程有限公司生产的LUMO半自动分析仪， 乙肝病毒标志物定量检测试剂为郑州安图生物工程有限公司试剂盒；酶联免疫吸附法检测乙肝病毒标志物试剂为上海科华生物工程股份有限公司试剂盒， 选择实验仪器为芬兰生产的W-k3酶标仪。

1. 2. 2 检测方法 对采集的200份血清标本分别采用化学发光酶免疫分析法与酶联免疫吸附法进行乙肝病毒标志物检测， 每次以定值参比血清作为质控， 检测方法严格按照仪器及试剂说明书进行。酶联免疫吸附法采用手工添加样品， 检测结果根据酶标仪结果显示判定为阳性或阴性；化学发光酶免疫分析法采用全自动加样器添加样品， 用LUMO半自动分析仪定量检测结果。

另取1.0 ng/ml HBsAg定值参比血清， 两倍稀释后分别采用以上两种检测方法检验， 测定两种检验方法的最低浓度。

1. 3 判定标准[2] 检测结果大于参考值的上限为阳性， 5项检测指标的上限标准分别为HBsAg：0.2 ng/ml， HBeAg：0.05 NCU/ml， HBeAb：2.0 NCU/ml， HBcAb：1.5 NCU/ml， HBsAb：10.0 mIU/ml。对单独一项为阳性或弱阳性或双阳性标本设置双空复查， 结果仍为阳性的则判定为阳性。分别统计各检测指标阳性、阴性的例数。

1. 4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P

2 结果

2. 1 两种方法检测5种乙肝标志物阳性结果比较 化学发光酶免疫分析法对HBsAg及HBeAb的检出率明显高于酶联免疫吸附法（P0.05）。见表1。

2. 2 灵敏度检测 化学发光酶免疫分析法检测的最低浓度为0.12 ng/ml， 酶联免疫吸附法检测的最低浓度为0.4 ng/ml。化学免疫酶免疫分析法的检测灵敏度高于酶联免疫吸附法。

3 讨论

乙肝病毒血清标志物[2]是乙型病毒性肝炎的主要病原标志， 基于我国严峻的乙型肝炎疫情与不断增加的乙型肝炎患者， 采用有效的病原标志物检测方法对乙肝的早期防治与乙肝药物治疗效果的评定具有重要意义。

酶联免疫吸附法[3]是检测乙肝标志物的目前应用最广泛的方法， 采用人工加样， 具有操作简单、快捷的检测优势。但通过临床研究发现[4]， 乙肝病毒测定结果为弱阳性患者在复查中也容易出现时阴时阳的情况， 采用酶联免疫吸附法进行复查， 结果的重复性较差， 说明酶联免疫吸附法灵敏性不高， 对临界结果的检测效率低。同时， 酶联免疫吸附法容易受试剂盒质量、仪器校准、工艺差别等众多原因的影响， 其检测结果可能存在较大差别， 稳定性较差。随着化学发光酶免疫分析技术的不断发展， 化学发光酶免疫分析法在乙肝病毒标志物的检测中逐步展现了其较高的应用价值。化学发光酶免疫分析法是借助发光底物自身的发光强度进行测定的分析技术， 相比于酶联免疫吸附法灵敏度较高。本次调查结果对200份血清样本分别进行化学发光酶免疫分析法与酶联免疫吸附法检测乙肝病毒标志物， 结果显示， 化学发光酶免疫分析对HBsAg的检出率为60.0%， 对HBeAb的检出率为24.0%， 明显高于酶联免疫吸附法的54.5%、17.5%（P

综上所述， 酶联免疫吸附法具有操作简单、方便快捷的优势， 但化学发光酶免疫分析法可有效检测出病毒标志物中的假阴性情况， 检测结果稳定性高、重复率高， 对准确显示乙肝病毒的感染进程、评价抗病毒治疗效果具有重要意义。为保证测定效果， 临床采用化学发光酶免疫分析法检测结果更准确， 可有效减少漏检、误检的发生率。

参考文献

[1] 廖奕.化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附法检测乙肝病毒标志物的比较. 大家健康（学术版）， 2014（10）：48-49.

[2] 郭辉. 化学发光免疫分析法与酶联免疫法测定乙肝病毒标志物的相关性分析. 中国伤残医学， 2013， 2（5）：270-272.

自动化免疫分析例6

章编号：1004-7484（2014）-03-1787-01

化学发光免疫分析起源于1977年，化学发光免疫分析主要利用了化学发光测定技术和免疫反应，化学发光测定技术有着非常高的灵敏性同时免疫反应有着非常高的特异性，通过两者的结合使得化学发光免疫技术成为现今最新的免疫分析技术。化学发光免疫分析技术较其他免疫分析技术而言拥有着高灵敏度、价格低以及操作简便等多种优点，正因为这些优点使得化学发光免疫分析技术被广泛的运用。

1 化学发光免疫分析技术的基本原理

化学发光免疫分析最关键的步骤就是化学发光以及免疫，免疫分析技术就是对分析的抗原进行标记，而化学发光分析技术就是对所产生的微观反应进行检测，以此来达到分析的目的。免疫分析就是利用抗原与抗体之间的特异性结合所产生的明显现象来检测所检测物质，而采用标记免疫分析就是通过对抗原进行放射性的标记，这样就能够更好的检测微观物质所发生的化学反应[1]。化学发光技术则是化学反应中的一种现象，化学反应必然伴随着能量的迁移，而具备能量的分子为了达到稳定的状态就要释放多余的能量，能量则是通过光形式释放出来，对所发出的光和能量迁移进行分析便可以知道内部所发生的化学变化。

2 化学发光免疫分析技术的应用

由于化学发光免疫分析技术不仅拥有较好的灵敏度以及较高的自动化程度，而且其还有较高的精密程度，所以得到了较多的应用。化学发光免疫分析技术在兽医学、临床医学以及食品分析中都得到了相当多的应用，下面将进行详细介绍。

2.1 化学发光免疫分析技术在兽医学中的应用 化学发光免疫分析技术在兽医学中的应用还处于早期阶段，因此没有得到较多的应用。主要原因则是化学发光免疫分析技术在兽医学的应用中会跨越化学、兽医以及生物学科方面的知识，而这样加大了化学发光免疫分析技术的应用难度，因此没有在兽医学中得到较多的应用。但是化学发光免疫分析技术仍然是兽医学中一项疾病快速检测的方法，即通过化学发光免疫分析技术可以精准快速的判定动物所发生疾病的原因，而且通过这项技术的运用还可以监测动物体内的疾病发生概率[2]。化学发光免疫分析技术在我国没有较多的应用到兽医学中，而且技术也没有国外先进，这进一步制约了化学发光免疫分析技术在我国的应用。国外化学发光免疫分析技术在兽医学中的应用较多，比如国外利用化学发光免疫分析技术来进行动物肠道病毒检测试验、猪肉中沙门菌抗体检测以及评价胰岛素浓度对奶牛繁殖性能的影响，并且取得了较好的成果。

2.2 化学发光免疫分析技术在临床医学中的应用 化学发光免疫分析技术在临床医学中有较多的应用，比在兽医学中的应用要更加广泛，而且在临床医学的应用中非常重要。美国通过对化学发光免疫分析技术进行改进，使得其具备更好的灵敏性以及精准性，现今化学发光免疫分析技术在临床医学中主要用来检测甲状腺系统、性腺系统、血液系统以及心血管系统中激素浓度。后来有科学家利用金刚烷衍生物在碱性磷酸酶的条件下可产生长时间辉光的特性将其运用到化学发光免疫分析技术中，即通过碱性磷酸酶来作为标记物，完善后的化学发光免疫分析技术科用来检测心脏病、传染病、糖尿病以及过敏症状，另外还可以用于血液系统和胰岛素的检测中。现今将化学发光免疫分析技术运用的最好的就是Roche公司，其所创造的ECL分析系统可以检测到及其细微的反应信号，并且特异性反应极为强烈，操作过程也非常快捷。

2.3 化学发光免疫分析技术在食品分析上中的应用 现今食品安全已成为人们越来越关注的问题，检测食品中含有的违规成分也有一定的难度。但是通过化学发光免疫分析技术的运用可以快速精确的测定食品中违规成分的含量，使得食品检测部门可以更好的测定食品中含有成分的含量。化学发光免疫分析技术可以用于鸡肉样品中CAP的检测以及牛奶中黄曲霉毒素的检测，国外科学家还利用化学发光免疫分析技术来测定牛奶、牛肉以及鸡蛋中肉毒梭菌毒素A的含量，由于化学发光免疫分析技术有着较高的灵敏度，所以所测定的结果非常准确，而且极大的节省了测试所需要的时间[3]。Yang M等科学家将增强型化学发光免疫检测技术以及电荷耦合器件结合起来创造了检测食品中葡萄球菌肠毒素B的技术，其灵敏度非常高、方法实用而且检测成本非常低。

3 化学发光免疫分析技术的新研究进展

3.1 新的标记物 化学发光免疫分析技术运用的重点就是检测内部微观化学反应的情况，而为了达到更好的检测效果就需要发光物质发光时间更加持久发光更加明亮，而这可以通过标记新的标记物来得以实现。各国科学家都致力于研究标记物的发光时间以及发光强度，标记物发光需要特定酶的催化，这需要科学家通过长时间的实践才能够证明哪一种标记物在哪一种酶的催化下才能够达到长时间的发光以及高强度的发光，另外对于标记物发光过程还需要较高的稳定性。目前科学家通过大量实验得到luminol-H2O2在HRP2A的催化下可以发出高强度而且长时间的光，而且发光的稳定性非常好。化学发光免疫分析技术能够快速、灵敏、精准的测定非常细微的物质含量，对于医学检测以及食品安全检测都有着较多的应用，通过不断的研究会使得该技术得到更广泛的运用。

参考文献

[1] 魏光伟，余永鹏，魏文康.化学发光免疫分析技术及其应用研究进展[J].动物医学进展，2010-03-20.

自动化免疫分析例7

文章编号：1004-7484（2013）-01-0463-01

化学发光免疫分析技术（chemiluminescence immuno-assay，CLIA），是在二十世纪八十年展起来的，它是比荧光免疫测定、酶免疫、发射免疫更先进的一种最新的免疫测定技术。这种技术主要用于对各种抗体、抗原、半抗原、脂肪酸、激素和药物的检测分析，下面就介绍一下这种技术的基本原理和分类。

1化学发光免疫分析技术的基本原理

化学发光免疫分析技术是由免疫分析和化学发光分析两个系统构成的。其中免疫分析是用标记物直接标记在抗原或抗体之上的，然后再经过抗原与抗体反应生成抗体免疫复合物，其中标记物可以是化学发光物质，也可以是某种酶。化学发光免疫分析系统是在免疫反应结束后，加入氧化剂或酶的发光底物，待发光物质氧化后就会形成一个处于激发态的中间体，会发射光子释放能量以回到稳定的基态，发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测，其中被测物的含量就是根据化学发光标记物与发光强度的关系利用标准曲线计算出来的。

化学发光的原理是指分子或原子中的电子吸收能量后，发生能级跃迁而释放光子的过程，能级跃迁过程是电子从基态到激发态的过程，实现了从较低能级向较高能级的跃迁。其中可以根据形成激发态分子的能量来源不同将发光过程分为化学发光（chemiluminescence）、光照发光（photoluminescence）和生物发光（bioluminescence）。

化学发光又可分为直接化学发光和间接化学发光，若参加反应的物质是一个反应产物分子，且被激发到能发射光的电子激发态，那么这就是直接化学发光过程。若参加反应的物质激发能传递到另一个未参加化学反应的分子D上，使D分子激发到电子激发态，D分子从激发态回到基态时发光，这种过程叫间接化学发光。

2化学发光免疫分析的分类

化学发光免疫分析根据应用于免疫分析体系中的方式不同，可以分为以下三类：

2.1直接标记发光物质的免疫分析这种分析方式是用吖啶酯直接标记抗体，作为抗原，然后与待测标本中相应抗体发生免疫反应，就会形成固相包被抗体一待测抗原一吖啶酯标记抗体复合物，到这一步后再加入双氧水氧化剂和氢氧化钠，这样环境就会呈碱性，吖啶酯就会在不需要催化剂的情况下分解、发光。

2.2酶催化化学发光免疫分析标本中的抗原（抗体）在发生免疫反应时所用的标记物为发光的酶，这种化学发光免疫分析方法是酶催化化学发光免疫分析。

2.3电化学发光免疫分析（ECUA）这种分析过程包括电化学和化学发光两个过程，具体是以三丙胺（TPA）为电子供体，用电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体（抗原），在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应。

3化学发光免疫分析在临床检验中的应用

就目前而言，化学发光免疫分析技术已经成为替代RIA的首选技术，且已经被广泛地应用于基础和临床医学的各个领域。下面就简要地谈谈化学发光免疫分析技术在临床检验中的几个应用。

3.1应用于传染性疾病的病原诊断作为评价和治疗机体免疫功能重要指标的重要血清学标志物乙型肝炎病毒表面抗原、抗体，以前诊断是否感染乙肝病毒用的是常规酶法，常规酶法的缺陷是可能使得部分低病毒含量携带者漏检。但是化学发光免疫分析具有高灵敏度和线性范围宽的特点，在传染性疾病的病原诊断方面其检测灵敏度比常规酶法高，Bowser等在测定感染人类免疫缺陷病毒的围产期儿童体内的单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒甲型肝炎病毒、及丙型肝炎病毒时给出了证明。

3.2应用于肿瘤标志物的分析肿瘤标志物包括蛋白质、酶、癌基因产物、激素等，它是由肿瘤细胞合成释放或机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。在患者的细胞中，血液中以及组织中都存在肿瘤标志物。化学发光免疫分析可以用于寻找新的肿瘤标志物，也可以进行体外早期辅助诊断和对术后的监测，对恶性肿瘤患者的具有重要意义。Mac等达到了对食管癌患者的诊断和病情监测，他们采用的方法就是检测血清中癌胚抗原的浓度、cyfra21-1的浓度、鳞状细胞癌抗原的浓度。Shabin和Raslan比较了AFP和人绒毛膜促线性激素这胎膜早破和健康孕妇阴道液中的两种标志物，发现AFP的敏感性和特异性最高。Sakaida等通过检测细胞色素C的含量得出C可能成为肝衰竭的新标志物。

3.3应用于心脏疾病的特征标记物测定临床上的心脏疾病常常采用同工酶定量测定，标记物为肌酸激酶和肌钙蛋白T＼肌红蛋白。Dutra等运用心肌肌钙蛋白cTnT受体分子制成了免疫传感器，可用于临床上早期检测心肌梗死。有文献报道同时检测了cTnT肌酸激酶同工酶CK-MB和肌红蛋白，相关系数分别为cTnT0.953-0.982；CK—MB0.835-0.999；肌红蛋白0.776-0.992，具有很好的相关性可用于检测临床标本。

4结束语

化学发光免疫分析技术具有高特异性和高灵敏度的特点，它将化学分析方法和免疫学分析方法的优点融合了起来，用这种方法分析简便、快速，且标记结合物稳定，没有污染，是非放射性免疫分析方法中最有前途的方法。现在在临床诊断和治疗疾病中应用的全自动化学发光免疫分析仪能够实现试剂稳定自动分析，且可以在短时间内得出精确的结果，可以说化学发光免疫分析检测技术的应用必将为未来迎来新的曙光。

参考文献

[1]魏光伟，余永鹏，魏文康，罗胜军，WEI Guang-wei.YU Yong-peng.WEI Wen-kang.LUO Sheng-jun 化学发光免疫分析技术及其应用研究进展[J].动物医学进展，2010，31（3）.

自动化免疫分析例8

【关键词】临床免疫学；免疫检验；实践；探索

临床免疫学是免疫学与临床医学的重要连接环节。免疫学检验是以免疫学原理为基础，利用各种具有敏感特性的标记技术，对各种病理和生理的免疫学指标行特异性、超微量地分析，包括细胞的、体液的诊治及预后评估[1]。就免疫学检验进行准确定位，是临床医生依据检验结果对疾病进行诊治和防控的有效技术手段，具有非常重要的研究价值。本文就临床免疫学和免疫检验的相关实施与探索进行综述如下。

1临床免疫学概念

临床免疫学属重要的免疫学分支部分，为免疫学应用到临床医学的途径。免疫学技术的发展和进步与临床免疫学技术的发展进步有着密切相关性，为临床及时、科学的应用免疫学新技术，在疾病的治疗、监测、确诊、预后中均发挥重要的引导及参考作用[2]。随着医疗科技的不断进步，临床上多种免疫学技术已被普遍开展应用，如流式细胞式和免疫细胞检测及分类技术、血清蛋白电泳技术及各种肽类物质、激素、细胞因子、肿瘤标志的检测技术等[3]。随着目前检验项目在临床的不断增多，临床医务人员及患者自身都对临床检验有更高的期待和要求，各种免疫学技术均需紧跟医疗科技发展步伐，更全面、迅速的发展，以尽快的与临床应用适宜，进而开展临床免疫学技术的崭新局面。

2临床免疫学促进新技术发展

技术的产生、发展和创新基础均需有相应的理论，如PCR技术、分子克隆技术等均为遗传学或分子生物学重要的具有划时代意义的技术。而这些技巧中，理论基础为DNA的双螺旋。同时免疫学的抗体理论与抗原对多种临床免疫学新技术的产生也起到了推动作用，如标记技术、沉淀、凝集等的发展进展[4]。近年来，受细胞生物学、分子生物学的不断渗透及免疫学的飞速积习难改展，使免疫学在理论上获得了较大的突破。

3临床免疫学新技术发展特点分析

3.1多学科交融临床免疫学经典技术包括免疫标记技术、溶血技术、中和技术、沉淀技术、凝集技术等。以上技术为临床免疫学基础，在临床免疫学传统及现代的理论中均占有较重要的地位。以上技术或其基础上发展创新的技术至今仍在科学研究和临床检验中广泛应用。但生命科学在不断发展，不同学科间渐较难明确区分和界定，形成广泛的渗透和交叉的局面，而遗传学和分子生物学的适体技术、分子杂交技术、PCR技术、染色质沉淀技术等免疫学新技术，使免疫应用范围和理论不断拓展。另外，临床免疫检验中，组织学、细胞学中的显微镜技术也为一项重要的技术手段。如由普通显微镜与免疫组织化学技术联合对抗原进行检测，自身抗体采用荧光显微镜与荧光标记技术联合进行检测。且电子显微镜对细胞间的相互作用和免疫细胞的行为可直接行动态观察。以上技术的应用，使临床免疫学技术得到了较大丰富，为发展提供了动力及方向[5]。同时免疫学检测数据显著多，用日益复杂，有效分析数据和正确应用结果显得较为重要故临床免疫学与生物信息学、医学统计学等学科的合作与交流也渐趋深入。

3.2高通量、智能化、自动化的免疫新技术临床免疫学检测具有同步化、智能化、自动化的特点，与传统手工操作有较大的区别，如微粒子酶免疫技术、电化学发学分析技术等，毛细管电泳技术也在临床广泛应用，目的，生物芯片技术使整个检验医学检测实现了大规模、平行化、高通量的要求。同时，组学技术、后基因技术、酶联免疫斑点技术的研究也不断深入，极大的满足了临床免疫学需要。

4免疫学检验定义

4.1临床免疫学中免疫学检验为重要组织部分以基础免疫学理论作指导，临床免疫学对免疫学方法及技术不断创新，在对疾病研究，特别是自身免疫病、肿瘤、传染病、血液病、免疫缺陷病、变态反应性疾病的病发机制、诊治、预后评估中发挥着重要作用，属免疫学分支学科，是基础免疫学内容与临床免疫学内容的中间环节，为临床医师对疾病进行研究的相关技术方法。

4.2免疫学检验的相关定义依据免疫学原理，特别是抗体与抗原反应原理，对各种敏感标记进行利用，如荧光素、发光物质、放射性同位素等，特异地、超微量的对各种病理和生理免疫学指标进行分析，包括细胞的和体液应用，行疾病诊治和评估的一组医学临床检验项目[6]。其要点为即对抗原抗体反应原理加以利用，又可对免疫学参数的各种内容进行检测。

5免疫学检验存在的问题

5.1定位目前，有一定数量的医疗单位中，尚未设立免疫学检验专业，无专业的检验设备，无实验室，无固定的专业的检验人员，免疫学检验中的一些项目被分散在微生物实验室和生化实验室进行检验，对专业的发展造成了一定影响。

5.2质量管理分析虽免疫学检验中大部分项目在各大医学中已参加了国家卫生部相关室间质量评估活动，但在对室内质量进行控制的环节中，仍较为薄弱。对于大部分免疫学检验项目，在质控品和标准品上，国内尚未做到有效统一，虽部分有供应，但项目不全，价格昂贵[7]。故多数试验室质量控制不达标，导致检验质量不稳定。目前，尚普遍存在试剂缺乏统一的现象，检验结果中的假阴性、假阳性较难杜绝，为质量管理及标准化检查带来了一定难度[8]。同时，专业的免疫学检验人员较少，缺乏高素质、高学历的带头人，同时也缺乏娴熟操作的技术人员[9]。此外，还存在研究内容与临床缺乏有效结合等，在疾病诊治中未发挥有效作用[10]。

自动化免疫分析例9

中图分类号：R392 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2017）01（c）-0225-

进入21世纪以来，免疫学成为了当前发展比较快的前沿学科。目前，免疫学科已经成为了全球科研ESI评价体系中的学科之一，并且各个国家也通过免疫学科的发展水平来衡量一个国家的综合科技实力。免疫学一方面能够帮助人类解决生命现象的本质问题；另一方面也对于人类重大疾病的机制破解和制剂的研发具有重大的意义。另外，免疫学相关的交叉学科的研究解决了人类的重大疾病，增进了人类的健康，推动了我国生物医药产业的发展，提高我国的经济实力，增强了我国的国民力量，并且结合了我国的重大需求，进一步深入系统地研究免疫学相关的交叉学科，可以使我国的免疫学科得到进一步的发展。

1 免疫学科与相关学科开展交叉合作研究的必要性

免疫学相关的交叉学科包含有新型免疫组织器官、单细胞、亚细胞层面的免疫功能和调节机制等。而一些新型技术的创新发展又促进了这些系统性免疫学的研究。这使得免疫学又与化学、光学、信息学等学科有着密不可分的联系。另外，免疫学与相关学科的交叉与合作使人类许多重大疾病的免疫机制得到破解，其治疗的手段也得到了改革和创新。在生命系统中，免疫系统有着极为重要的作用，并且与内分泌系统、神经系统等都有着紧密的联系，有着互相调控的作用。而对于免疫学科与相关学科的交叉研究能够很好地破解人类的一些重大疾病。因此，在我国免疫学快速发展并且在国际上的地位显著提升的过程中，开展免疫学与相关学科交叉合作研究对于免疫学所能解决的人类重大疾病的诊疗新策略具有非常重要的战略意义，也需要基金委在政策和基金方面得到资助。

2 免疫学与其他学科交叉研究的现状与重要研究成果

2.1 免疫学与生命科学内部学科交叉研究的重要成果

我国免疫学的快速发展一方面是由于免疫研究技术方法得到了改进；另一方面也是由于免疫学与结构生物学、干细胞生物学、生物信息学等相关学科的相互促进和发展。第一，免疫学与结构生物学的交叉。研究了病毒侵染和免疫应答机制，具有一定的创新性，并且能够从感染免疫学当中研究出结构免疫学这一重要的分支。第二，免疫学与干细胞生物学的交叉。目前，生命科学研究的新方向是多能干细胞的培养与器官重塑。而干胞生物医学转化的前提是需要免疫学交叉对于干细胞的免疫分化和排斥的研究。第三，免疫学与演化生物学的交叉。免疫学与演化生物学的交叉揭示了抗原受体及免疫应答多样性的物种起源。第四，免疫学与生物信息学的交叉。随着信息化时代的到来，受生物信息学的影响，免疫学的研究模式已经转换成为了数字化可预测的分析模式。

2.2 免疫学与其他学科交叉研究的重要成果

第一，免疫学与临床医学交叉的相互促进。对于免疫学与自身免疫性疾病来说，自身免疫性疾病对人类的危害程度远远超过了感染性疾病。而免疫学对自身免疫性疾病的研究使其有了很大的发展。而免疫学与肿瘤学的交叉在近几年也取得了突破性的进展。肿瘤疫苗的上市增强了T细胞的应答，延长了肿瘤晚期患者的存活率。而对于免疫学与器官移植而言，免疫学的研究使器官移植成功率得到了很大的提高。第二，化学表观修饰时免疫调节的重要机制。化学学科一方面从微观分子化学键角度分析了免疫分子，还研究了免疫表观调节的化学修饰机制，提高了免疫调节研究的作用。第三，糖结构生物学开拓了解析免疫分子功能的新视野。近年来，糖结构免疫学研究发现多糖及受体对于免疫细胞具有一定的调节功能。

从以上几点来看，目前免疫学和其他的生命学科、化学学科、医学科学领域的交叉合作都得到了很大的关注，并且在代谢疾病、免疫治疗以及化学表观调控机制等方面都得到了很多具有突破性的进展。

3 其他学科作为关键辅助手段促进免疫学高水平发展的成果

3.1 化学修饰与示踪技术是免疫学在体实时研究的重要手段

单克隆抗体检测功能把荧光和酶化学修饰作为其应用的前提。可视化技术中运用了荧光分子修饰与化学光学成像技术。而一些化学、光团以及金属离子修饰使佐剂、示踪剂以及转染增效剂具有了更多的功能，也推动了免疫学向着更高层次发展。另外，免疫分子的相互作用促进了免疫网络之间的作用和调节。因此，对于免疫调节功能的研究可有效实现对于重大疾病的免疫干预。近年来，计算机模拟技术能够实现高效鉴定和化学改构，使小分子免疫调节得到快速的发展。

3.2 材料科学在免疫佐剂、递送体系、示踪检测试剂方面的重要应用

近些年，材料科学和免疫学科的交叉和联合得到了快速的发展。而人类对于新型疫苗、人工器官以及生物材料的需求也加快了免疫学科与材料学科的交叉和联合。第一，对于免疫治疗新分子或者药物来说，特异性靶向问题成为了最应注意也是必须解决的问题。材料学的研究实现了免疫分子的靶向问题。例如，PH敏感材料使纳米颗粒在胃肠道的不同部位得到有序或者定向的释放，有效推动了肠道免疫研究以及口服药物的开发。第二，人类疫苗佐剂的主要成分为皂苷和糖脂等。而目前开发的固有免疫激动剂能够有效增强机体的免疫应答能力。其中IL-15以及全反式维甲酸等分子有可能成为新型的黏膜佐剂。第三，一些新型材料的免疫示踪技术已经实现了在机体和细胞层面对于免疫应答的实时监控。目前，我国已经通过在体单细胞免疫成像技术揭示了B-T细胞的相互作用和向浆细胞转化的流程。

3.3 信息学与数学工具将实现免疫组学数据的分析归纳

随着信息化时代的到来，我国已建立了关于病原体和疾病相关的大规模数据库。数学、信息科学与免疫学科的交叉和联合实现了数据的采集、标记和关联，分析了不同标准下的数据分类和集成以及不同筛选条件下的数据提取、运算和分析等。

4 我国免疫学与相关学科交叉的不足与挑战

在国际上，免疫学相关的交叉学科得到快速发展的同时，我国也应当意识到在免疫学相关的交叉学科发展的不足以及所面临的挑战。一方面，对于免疫应答的代谢、表观调控等基层理论而言，我国虽然已经有了一定的成就，但是却没有建立一定的新理论和新体系。另一方面，我国目前无法将基层理论和临床进行紧密结合的研究，使我国的自身免疫疾病研究的大规模临床优势资源得不到有效的利用。另外，我国在肿瘤免疫研究方面得不到创新性的发展，使得肿瘤特异性抗原、免疫调节以及免疫治疗的机理研究得不到一定突破性的进展。最后，在抗感染疫苗方面，我国也只是在戊型肝炎疫苗得到了一定的创新性法，但是在结核、乙肝、艾滋病等方面的免疫治疗却没有重大的突破。在生物医用新型材料方面，我国缺乏一些实质性的学科交叉研究。而在化学修饰分子和生物材料对免疫系统的影响方面也需要进行深入的研究。目前，我国也缺乏一些具有自主知识产权的大数据分析仪器和软件，这也已经成为了免疫组学研究应当面临的突破口。

5 未来的优先资助方向建议

在我国免疫学科快速发展的同时，免疫学科也派生出了多个具有活力的交叉型新学科。例如，代谢免疫学科、结构免疫学科、神经免疫学科等，使免疫学研究的范畴从疫苗研发、抗原体结合扩展到人体组织器官生理和病理机制、生命现象的本质、免疫应答的结构等，并在很大程度上使生物医药产业的发展得到创新。随着免疫学的迅速发展，当前免疫学需要注重的课题是有效地将免疫学和医学学科、化学学科以及生命学科等诸多学科有机地联系起来，解决共同的科学问题，实现对于领域前沿的重大突破。

5.1 免疫应答的化学表观调控

目前，我国应当深入了解免疫识别以及应答的核心问题是表观调控信号对组织器官的特异性免疫应答的影响以及对于人体免疫表观调控机制的探索。

5.2 代谢的免疫调控

各类免疫细胞需要通过代谢调控来实现分化和增殖。生命本质的研究需要了解免疫细胞代谢的免疫调控和信号传导、宿主以及微生态代谢的关系，也要能够免疫细胞的代谢调控、代谢产物的组学分析之间的流向和转运调控等。这也能够成为人类重大疾病防治的理论基础和新分子靶标。

5.3 未来资助的优先领域

为了能够促进我国免疫学科的持续、快速发展，我国应当从3个方面来进行研究。第一，免疫新器官、新亚群以及新分子的新发现。重新认识和研究各个免疫新器官的基本免疫学特性，发现和鉴定新的免疫细胞亚群，研究生理和病理下的免疫细胞的多样性和可塑性，完善和描绘免疫细胞和免疫分子的作用网络。第二，免疫应答的单细胞和亚细胞的特征以及调控机制。联合化学和生物学方法促进了免疫学示踪技术的发展。研究生理和病理下的免疫细胞的轨迹以及相互作用。第三，广谱中和抗体产生和作用的新机制。广谱中和抗体产生的动力学，广谱中和抗体的基因突变以及维持机制，广谱中和抗体诱生的B细胞调控机制等。第四，固有免疫应答和调节新机制。固有免疫应答在微生态调控中的作用，固有免疫应答与调节机制。第五，代谢与免疫。免疫细胞的代谢特征、转导与调控机制，细胞自噬与免疫的调节等。

6 结语

综上所述，随着我国免疫学科的快速发展，我国对于免疫学也有着非常高度的重视和支持。这也标志着我国对于免疫学相关的交叉学科的深入的必要性。针对目前我国免疫学相关的交叉学科研究的现状和挑战，我国也通过开展一些论坛来分析当前我国免疫学相关的交叉学科发展的重要科学问题，促进了我国免疫学和生命学科以及其他相关学科的交叉发展。

⒖嘉南

[1] 庆祝上海市免疫学研究所建所三十周年暨国际免疫学进展学术讨论会通知[J].现代免疫学，2009（5）：363.

[2] 何兴华.免疫学与营养免疫学[J].西部医学，2006，18（2）：219.

自动化免疫分析例10

降钙素原（Procalcitonin PCT）在临床主要应用于感染性疾病的鉴别[1]，是诊断血行感染、菌血症、败血症的一个较好指标[2-3]。目前PCT的检测方法主要有放射免疫法、双抗体夹心法、胶体金法、免疫荧光法、免疫透射比浊法等。本研究选用国产免疫透射比浊法，具有快速、简便，且价格相对较低廉的特点。根据美国临床和实验室标准化协会9CLSI）和医学实验室认可标准（ISO15189）对实验室质量的要求[4]，实验室对检测系统（仪器、试剂、校准品等）必需进行性能验证[5]。因此，实验室需要对厂商声明的主要分析性能进行验证。本文对AU5800检测系统测定降钙素原（PCT）进行精密度、线性范围、参考区间等指标的方法学评价，再与酶免疫荧光法检测结果进行比对，观察结果相关性，以此来评价该检测方法在临床上的价值。

1 资料

1.1仪器 贝克曼AU5800全自动生化分析仪，梅里埃全自动荧光分析仪。

1.2试剂

1.2.1安徽大千生物工程有限公司生产的降钙素原测定试剂盒（免疫透射比浊法）（批号085813），标准品（批号084113）和质控品（批号084213）。

1.2.2梅里埃诊断产品（上海）有限公司进口的降钙素原测定试剂盒（酶免疫荧光法）（批号1002326640），校准品（批号1057790）和质控品（批号1057880）。

1.3 标本 患者标本为2013年10～11月实验室接收的67例临床送检标本。酶免疫荧光法随时检测送检标本，剩余血清-80℃保存用于免疫比浊法测试（一次性完成）。正常人群均为健康体检者，年龄16～77岁，选择血常规、CRP正常，即无急、慢性炎症的体检合格标本20例。

2 方法

2.1免疫透射比浊法 样品中的PCT与试剂中的PCT抗体发生抗原-抗体反应，形成复合物，从而引起透光度的减低，在一定范围内与样本中的PCT的量呈线性相关。

1.2酶免疫荧光法 结合一步免疫测定夹心法和最终荧光检测来进行测定。

2.3 精密度评价：按照CLSI EP15-A2，取2个浓度水平质控品，5d实验，每天做一批，每批每个水平3次重复测定，计算批内精密度和批间精密度的均值、标准差和变异系数。

2.4 线性评价

2.5参考区间评价

2.6相关性评价 通过67例不同病例分别用酶免疫荧光法和免疫透射比浊法测定，比较两者的相关性。

2.7统计学分析 实验数据采用SPSS 13.0软件和Microsoft Excel 2000软件进行统计分析。

3 实验结果

3.1 PCT精密度结果 精密度评价结果符合厂家声明的批内精密度CV≤8.0%、批间精密度CV≤15.0%。该检测系统的批内精密度和批间精密度均满足检测要求（见表1）。

3.2 线性结果

3.3参考区间的验证

3.4相关性实验

图2 免疫比浊法和免疫荧光法检测PCT结果比对

3 讨论

根据医学实验室认可标准（ISO15189）对实验室质量的要求，实验室对检测系统必需进行验证。对试剂验证包括：精密度、线性、准确度和参考范围等[6]。

精密度评价按照CLSI EP15-A2文件进行，实验数据显示在AU5800全自动生化分析仪上PCT测定的精密度达到了厂家的检测声明，批内和批间精密度分别小于8%和15%。线性评价即分析测量范围评价根据EP6-A文件，采用简便的平均斜率法。在AU5800全自动生化分析仪上PCT的浓度在0-58.8ng/mL范围内具有良好线性关系，由于PCT达到80ng/mL的血清标本难以获得，最高检测限58.8ng/mL偏低于厂家的最高测定值，有待于进一步验证。参考区间的验证参考NCCLSC28-A2文件，选择20份体检合格的健康人血清标本全部通过验证。与法国梅里埃诊断产品（上海）有限公司进口的降钙素原测定试剂盒（酶免疫荧光法）进行相关性实验，表明PCT免疫比浊法结果同样可靠（n=67，R2=0.9607）。

目前，检测PCT的方法很多[7]。传统的放射免疫法敏感性较高，但检测时间较长，且有放射性元素污染，使用受限；胶体金法为半定量法，不依赖仪器，操作简便快速，但敏感性低，只能作为临床筛查；免疫发光法[8]具有敏感度高、特异性强等特点，但是成本昂贵，不利于临床推广。免疫比浊法简便、快捷，适用于波长包括600nm的各种生化分析仪，可满足临床急诊及批量检测的需要；而且成本较低，可以大大减低患者的检测费用。

综上所述，免疫比浊法检测PCT的各项性能指标进行验证和评价，均能满足临床检测的要求，具有良好的发展前景。

参考文献：

[1]杨滨，康梅.降钙素原在细菌感染疾病诊断及治疗中的应用[J].现代预防医学，2009，36（3）：596-597.

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