基因工程疫苗例1

[中图分类号]Q789-01 [文献标识码]A [文章编号]1009-5349（2014）11-0081-01

自Edward Jenne医生发明天花疫苗开始，已有几千种疫苗被开发出来，疫苗逐渐成为人类与疾病做斗争的重要武器之一。传统疫苗具有生产的成本高、疫苗中含强毒性致病物质、减毒株突变及部分疾病用传统的疫苗防治收效甚微等缺点。所以，研制更安全、更高效的疫苗十分必要。

DNA重组技术为新一代疫苗――基因工程疫苗的研制提供了全新的方法。基因工程疫苗是指应用DNA重组技术，通过基因组改造，降低病原微生物的致病性，提高免疫原性，进而达到防治传染病的目的。迄今为止，基因工程疫苗是最先进的疫苗，相比传统疫苗而言它有巨大的优势。

一、基因工程疫苗种类

应用基因工程技术开发的已经使用和正在研制的新型疫苗种类主要有基因工程亚单位疫苗、基因工程活载体疫苗、核酸疫苗、合成肽疫苗、转基因植物可食疫苗等。

（一）基因工程亚单位疫苗

该类疫苗仅包含病原体的抗原，不包含病原体的其他遗传信息。基因工程亚单位疫苗通过表达病毒的主要保护性抗原蛋白获得免疫原性，具有安全、便于规模化生产等优点。该类疫苗的制备步骤如下：①了解编码具有免疫原活性的抗原蛋白对应的基因信息。②从大肠埃希氏菌、酵母、转基因动植物等表达系统中选择最适表达载体。如：酵母表达系统已经大规模生产人用重组肝炎疫苗。基因工程亚单位疫苗可细分为：细菌性疾病、病毒性疾病和激素亚单位疫苗。

1.细菌性疾病亚单位疫苗

分离和鉴定致病菌主要免疫原和毒力因子是研究细菌性亚单位疫苗的基础，目前已研制出与炭疽、大肠杆菌病、牛布鲁氏菌病等对应的亚单位疫苗，均能对相应的疾病产生有效的保护作用。史百芬等发现RSVF蛋白亚单位疫苗（PFP-1）注射接种后接种者无呼吸道疾病加剧作用。

2.病毒性疾病亚单位疫苗

大多数病毒基因组已经被克隆和完全测序，因此病毒性亚单位疫苗的研制相对简单。现在病毒性疾病亚单位疫苗主要有口蹄疫、狂犬病、乙肝疫苗等。中国台湾省科学家研制的禽流感亚单位疫苗效力远比灭活疫苗高。祁贤等应用酵母系统表达生产鸡传染性腔上囊病病毒VP2亚单位疫苗，发现其可完全取代传统灭活疫苗。

3.激素亚单位疫苗

该疫苗是以生长抑制素为免疫原的一类疫苗。杜念兴等将大肠埃希氏菌中表达的生长抑制素基因与HbsAg基因融合，通过Vero细胞表达，结果发现表达产物具有良好的免疫原性。杜念兴等用SS基因疫苗免疫小鼠，发现口服型SS基因疫苗免疫小鼠后可在小肠表达HBsAg/SS融合蛋白，推测该基因疫苗刺激机体表达蛋白后能产生SS抗体。

（二）基因工程活载体疫苗

此类疫苗生产主要有两种方法，一是使非致病性微生物表达某种特定病原物的抗原决定簇基因，进而产生免疫原性，另一种是致病性微生物被修饰或去掉毒性基因，但仍保持免疫原性。活载体疫苗结合了活疫苗和死疫苗的共同优点，在免疫力上具有很大的优势，分复制性和基因突变活载体疫苗。

（三）核酸疫苗

核酸疫苗接种后，抗原合成、增加与病原自然感染十分相似;还具有免疫原性单一;易构建和制备，稳定性好，成本低廉，适于规模化生产等优点。

二、展望

疫苗开发具有安全性、有效性、价廉性、易推广性等特点。基因工程疫苗具有传统疫苗无可比拟的优点，是疫苗产品开发的主要方向。研制多联或多价疫苗是基因工程疫苗的主要发展方向。

【参考文献】

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[3]王恩秀，陈伟华，杜念兴.生长抑素基因工程疫苗对大鼠生长及免疫的影响[J].中国兽医学报，2002（5）.

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[6]刘学东，包振民，王志亮.禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗设计、表达制备及动物实验研究[J].同济大学学报（医学版），2011（6）.

[7]祁贤，汤奋扬，李亮等.新甲型H1N1（2009）流感病毒的早期分子特征[J].微生物学报，2010（4）.

基因工程疫苗例2

戊肝疫苗的成功研发，标志着我国在生物制药原始创新领域取得重大突破。它的面世让中国在基因工程病毒疫苗的原始创新上实现了零的突破。11.3万人、30余万针次的研究显示，该疫苗具有良好的安全性和保护性。

疫苗研发团队的核心成员——厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心主任夏宁邵教授表示：“重组戊肝疫苗是迄今唯一使用大肠杆菌表达系统研制的病毒疫苗。它的成功研制扭转了国际医药界中‘原核系统不能用于病毒疫苗研制’的传统认识。

“与传统灭活疫苗和减毒活疫苗比较，基因工程疫苗的研发不依赖于病原体的培养，因此对于大量尚未建立成熟体外培养技术的病原体也能进行疫苗的研制。在生产过程中，基因工程疫苗完全不涉及病原体，消除了由于病原体灭活不彻底或减毒不完全导致的安全性问题。不仅如此，基因工程疫苗的研发还可通过精心设计的纯化过程实现对生产过程中伴随的各类杂质的高效清除和残余成分的高度可控，降低了由于杂质导致的各类接种副反应的风险，提高了疫苗的安全性和耐受性，同时还能提高不同疫苗生产批次间的均一性。”

从1998年开始，时任国家试剂与疫苗中心主任、厦门大学公共卫生学院院长的夏宁邵便带领着他的团队，着手进行戊肝疫苗的研发。与所有的新药研发一样，重组戊肝疫苗的研发并非一路坦途。

历经14年艰苦研发，由厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心和企业的200余名科研人员组成的课题组，在基础研究领域、应用基础研究领域和应用研究领域，取得了保护性抗原识别及结构表征、病毒颗粒组装机制等多项发现成果，并突破了原核表达类病毒颗粒、高效纯化及体外自组装等一系列关键技术障碍，创建出具有多项全球自主知识产权的核心技术体系。

夏宁邵说：“戊肝疫苗是国家工程的成果，也是产学研协同创新的成果。”这份30微克的戊肝疫苗，不仅见证着研发人员的辛劳，同时也记录着我国重大科技专项自主创新的步伐：自2005年起，国家863计划开始对戊肝疫苗项目进行支持，有效地带动了地方、企业投入研发资金近5亿元，其临床研究也被列入“十一五”863计划重大项目中，这为课题组在国内外率先研制成功戊型肝炎疫苗提供了重要支撑。

疫苗研发以集成创新为主

作为全国政协委员，中国食品药品检定研究院菌种室主任王国治，一直关注着疫苗领域的发展。对夏宁邵团队所取得的成功，他难掩心中的喜悦：“我国能在世界上第一个研发出戊肝疫苗确实非常令人振奋！”

就国内疫苗研发的整体水平而言，王国治直言不讳：“我国在疫苗研发领域的基础研究力量还比较薄弱，十个研发有九个都出不了结果。而国家又太过于强调疫苗研发的完全自主知识产权，这与我国目前的疫苗研发水平不相符合。”针对我国在疫苗领域现有的研发水平，“在引进国外成熟技术的基础上进行整合创新、集成创新才是这个阶段的重点。”

目前整个疫苗产业还缺少一种系统的协作，“这与国家在疫苗研发领域和产业规划上缺乏一种整体的顶层设计有关。”

受多种因素制约，国家免疫规划疫苗政府定价总体水平偏低，利润空间较小，以一支重组蛋白类的乙肝疫苗为例，国家定价只有3块多钱每人次，这在一定程度上影响了企业提高产品质量和进行产品升级换代的积极性。第二类疫苗则为市场调节价格产品，流通环节较多，市场价格偏高。

“疫苗产业是关系国计民生的朝阳产业。”对此，王国治建议，在投入上，对与老百姓生命利益息息相关的和研发成本高、失败风险大的一类疫苗，以及共患病的疫苗，国家应当加大扶持力度，而对具有良好发展前景和自主知识产权的二类疫苗，则应当以引导企业生产为主。

加大投入优先发展疫苗产业

对疫苗产业的明天充满同样期待的，还有全球第一支甲流疫苗的生产企业——北京科兴生物制品有限公司的总经理尹卫东。在他看来，接种疫苗不但是保护自己的一种措施，同时也是保护他人的一种手段。

“然而目前，人们对接种疫苗的社会认知度却还远远不够。”尹卫东举例说，为了减少老年人群因流感并发症带来的死亡，北京市政府每年都为60岁以上的老人免费接种流感疫苗，却只有约50%的老年人进行了自愿接种。

尹卫东说，“如果没有疫苗产业的发展就提供不了这样的服务。疫苗产业不仅具有技术高附加值的特性，而且还能节省资源和能源，对整个经济社会的发展具有保驾护航的作用，应该得到优先发展。”

作为一个企业家，尹卫东对疫苗产业的前景既看好又担忧：疫苗研发实现产业化之后，国家如何使用这种疫苗决定了疫苗使用的范围和方向。而在现行的政府采购“双信封”机制中，却常常出现重价格、轻质量的现象。

疫苗研发本身具有不确定性。企业自身控制风险的能力较小，而实现产业化需要有除技术以外的生产要素的巨大投入，包括产业化基地的建设等都是必不可少的投资。如果国家在生产要素的政策上不加以扶持，这个战略性新兴产业就很难得到进一步发展，最终只会让外国的企业和资本乘虚而入。(中国科技网)

基因工程疫苗例3

疫苗接种是一种免疫预防策略，其目的是使身体能够制造自然的生物物质，用以提升生物体的对病原的辨认和防御功能［1］。文献认为［2］，免疫规划工作是保护儿童健康，提高人群免疫水平，阻断并达到最终消灭针对传染病的最有效手段。为了解江西省吉安市适龄儿童扩大国家免疫规划疫苗接种情况，笔者于2010年10月23至24日在吉安市吉州区组织开展了一次扩大国家免疫规划疫苗接种状况的抽样调查。现将结果总结报告如下。

1 对象和方法

1.1 调查对象 2010年10月23至24日在吉州区随机抽取了315名儿童进行考核。

1.2 调查方法 经统一培训的专业人员担任调查员，每个接种点入户查阅儿童预防接种证、卡记录和询问家长。

1.3 判定标准 ①合格接种的判定标准：有接种证和接种卡的以接种证为准，无接种证有接种卡的以卡为准，无接种证和接种卡的视为未接种。对每名儿童的合格判定只能选择接种证或接种卡一种方式，必须同时符合以下标准才能判定为合格接种：①有准确的出生年月日和接种年月日记录，内容填写齐全，记录清楚，不缺项。②免疫起始月龄不提前，接种针(剂)次间隔不缩短(≥28 d)。③乙肝疫苗首针及时接种，乙肝疫苗、卡介苗、脊灰糖丸、百白破、麻疹、A群流脑、乙脑等基础免疫疫苗在12月龄内完成，甲肝疫苗在24月龄内完成，A+C群流脑、白破、和麻疹等加强免疫疫苗在规定的时间内完成。②卡证相符判定：预防接种卡、证所填项目全部相符(包括姓名、性别、出生年月日、接种年月日等)，有一项不一致或明显涂改者判为不相符。

2 结果

2.1 基本情况 共调查了吉安市吉州区3个乡(镇、街道)9个村(社区)级接种单位共315名儿童，建卡 315人，建卡率 100.00%；建证 315人，建证率 100.00%；卡证相符257人，相符率81.59%。

2.2 扩大国家免疫规划疫苗接种情况

2.2.1 原有疫苗接种情况 基础免疫卡介苗应种315人，实种315人，接种率 100.00%；脊髓灰质糖丸全程应种315人，实种315人，全程接种率 100.00%；百白破全程接种应种315人，实种315人，全程接种率 100.00%；乙肝疫苗首针接种315人，首针接种率100.00%；首针及时接种278人，及时接种率 88.25%；乙肝全程接种311人，全程接种率98.73%。

2.2.2 新增疫苗接种情况 基础免疫乙脑减毒活疫苗应种315人，实种304人，接种率 96.51%；A 群流脑全程应种315人，实种301人，全程接种率 95.55%；甲肝减毒活疫苗应种315人，实种 293 人，接种率 93.02%；加强免疫乙脑减毒活疫苗应种315人，实种287人，接种率 91.11%。

2.2.3 替代疫苗接种情况 基础免疫麻风二联疫苗(含麻疹疫苗)应种315人，实种307人，接种率97.46%；加强免疫无细胞百白破三联疫苗(含全细胞百白破疫苗)应种315人，实种 287人，接种率91.11%；麻腮风疫苗(含麻腮/麻疹疫苗)应种315人，实种289人，接种率91.75%。

3 讨论

实施免疫规划是控制和消灭相应传染病最经济、有效的手段，实施扩大国家免疫规划工作是国家惠民政策的具体体现。客观地掌握辖区内接种率现状是判断是否达到免疫规划目标预期效果的重要步骤，也是评价免疫规划执行情况的重要指标［3］，我国免疫规划工作的重点在基层，影响基层免疫规划工作的因素复杂、多样［4］。张涛等［5］认为对不同类型的儿童，影响接种率及时性的因素不同，应采取不同的措施提高儿童照顾者对疫苗接种的知晓率。接种疫苗后因各种原因常常会发生异常反应事件，靳里平［6］认为疫苗接种风险因素主要有疫苗本身质量、接种者自身和疫苗接种过程中的风险因素等因素，并认为异常反应事件的防范关键在于不断提高接种人员的业务素质。

本研究中，调查数据显示，吉安市吉州区抽样调查的315名儿童，建卡率 100.00%，建证率 100.00%；卡证相符257人，相符率81.59%。原有疫苗接种情况中，基础免疫卡介苗接种率 100.00%；脊髓灰质糖丸接种率 100.00%；百白破全程接种率 100.00%；乙肝疫苗全程接种率98.73%。新增疫苗接种情况中，基础免疫乙脑减毒活疫苗接种率 96.51%；A 群流脑全程接种率 95.55%；甲肝减毒活疫苗接种率 93.02%；加强免疫乙脑减毒活疫苗接种率 91.11%。替代疫苗接种情况中，基础免疫麻风二联疫苗接种率97.46%；加强免疫无细胞百白破三联疫苗接种率91.11%；麻腮风疫苗接种率91.75%。提示通过各级免疫规划工作人员共同努力，吉安市吉州区扩大国家免疫规划疫苗接种工作正在有序开展，原有免疫规划疫苗合格接种率继续保持在95%以上，扩大国家免疫规划新增疫苗合格接种率达到90%以上。

参 考 文 献

［1］ de Jager SC， Kuiper J.Vaccination strategies in atherosclerosis.Thromb Haemost. 2011 Nov；106(5)：796-803.

［2］ 崔清荣，葛君华，陆英骅，等.天台县2008-2011年疫苗接种率调查.浙江预防医学，2012，24(01)：32-34.

［3］ 罗田发，胡德华. 2009年瑞金市儿童扩大国家免疫规划疫苗接种率调查.预防医学论坛，2010，16(8)：704-706.

基因工程疫苗例4

目前使用的多为基因工程乙肝疫苗，昔日使用的血源性疫苗已基本淘汰(原因是有引起血源性疾病的嫌疑和浪费大量的血浆)。基因工程乙肝疫苗是利用现代基因工程技术，构建含有乙肝表面抗原基因的重组质粒，它可以用于预防所有已知亚型的乙肝病毒感染。现在用的基因工程乙肝疫苗为乙肝重组脱氧核糖核酸酵母疫苗和重组牛痘病毒疫苗，剂量为每支5微克。

二、为何要打乙肝疫苗?

乙肝疫苗可以成功预防乙肝病毒的感染，新生儿一出生就接种乙肝疫苗，基本可以确保将来不得乙肝。 现有的肝硬化、肝癌多从乙肝发展而来，成功地预防乙肝，实际就是防硬化、防肝癌第一针。目前乙肝疫苗较便宜，每支几元钱，民众都能接受。

三、乙肝疫苗的正确使用方法是什么?

；也有采取出生后立即注射1支高效价乙肝免疫球蛋白，及3次乙肝疫苗(每次15微克，生后立即及1月、6月各注射1次)，2个方案保护的成功率都在90%以上。

 

四、接种疫苗后不产生抗体该怎么办?

五、接种疫苗后，多长时间需要再次接种?

六、乙肝疫苗能和其他疫苗同时使用吗?

乙肝疫苗可以和流脑疫苗、卡介苗、白百破、脊髓灰质疫苗、乙脑疫苗同时接种，接种程序按照计划免疫所要求的顺序进行。但是乙肝疫苗最好不要和麻疹疫苗同时使用。

七、意外接触乙肝病毒者如何打乙肝疫苗?

八、接种乙肝疫苗会不会传染上其他传染病?

接种肝炎疫苗不会引起其他肝炎发生，也不会被传染上其他疾病。乙肝疫苗在生产过程中有严格的质量标准，其中许多工

序都能杀死血液中包括爱滋病病毒在内的病原微生物，经过临床观察是安全可靠的。值得提出的是，使用不合格产品如注射破损、变质疫苗，或注射过程不按无菌要求操作，共用注射器或针头，可染上肝炎或其他传染病。还有一部分人原来是隐性传染者，病毒呈低水平复制状态，“两对半”检查正常，需要用核糖核酸增殖法检出病毒(hbvdna阳性)，这种人注射疫苗后不会有表面抗体形成。

 

九、如果在边远地区，尚无法做到乙肝疫苗的普种怎么办？

基因工程疫苗例5

疫苗接种情况对于儿童的身体健康具有极大的影响，本次研究旨在确定国家免疫规划疫苗接种的基本现状，对其影响因素进行分析[1]。笔者从2013年4月～2015年4月2年时间内我疾控中心人口数据资料、日常督导调查资料、常规接种率报表资料入手展开研究，现共享研究成果。

1资料与方法

1.1一般资料 分析2013年4月～2015年4月2年时间内我疾控中心人口数据资料、日常督导调查资料、常规接种率报表资料，从而分析疫苗接种现状。

1.2方法 通过深入分析和研究人口数据资料、日常督导调查资料、常规接种率报表资料，找出疫苗接种现状和影响因素。

1.3统计学方法 将研究结果的数据输入SPSS23.5软件包，采用统计学分析数据，用x±s用以表示计量，用百分数（%）、例数（n）用以表示计数，如果数据分析结果显示P

2结果

通过详细和深入分析常规接种率报表可知，甲肝疫苗、乙脑疫苗、流脑疫苗、麻风疫苗、百白破疫苗、脊灰疫苗、乙肝疫苗、卡介苗等"八苗"当中，每种疫苗的接种率基本为98%或者超过98%。

通过详细和深入分析日常督导调查接种率结果可知，"八苗"当中，甲肝疫苗的接种率仅为95.55%，接种率相对较低，其余七种疫苗的接种率均为100%。

通过详细和深入研究人口资料数据可知，"八苗"的基础疫苗接种率基本超过95%，基本符合国家的相关要求。

3讨论

儿童免疫规划疫苗接种率的几大影响因素有：①客观因素。我们也知道，现在的接种方式基本以集中预防接种门诊为主，这种集体式的接种方式在某种程度上规范了接种程序，接种的安全性较高，然而这种接种方式服务半径太大，也就说如果国家或者接种单位的宣传不到位，在某种程度上降低了接种率[2]。②主观因素。主观因素主要体现在预防接种单位工作积极性和主动性不高，另外，部分预防接种单位没有与教育部门进行协调，导致疫苗补种工作难以实施到位。甚至有些预防接种单位没有尽快安排一类疫苗接种，而是采用二类疫苗取代一类疫苗接种。在很大程度上降低了接种率[3]。③其他原因。虽然，免疫规划工作获得了良好的效果，控制了传染病的流行和蔓延 [4]。然而，有些媒体、网络、电视报道了部分接种的异常反应，使得部分家长对接种疫苗有了错误的认识，甚至对接种产生恐惧、排斥等心理。导致这些家长的孩子没能按时接种，大大降低了接种率[5]。

提高儿童免疫规划疫苗接种率的几大措施：①加大力度管理和建设预防接种中心。首先要加大建设接种门诊的硬件设施，并且逐步建设先进的数字化预防接种中心，为接种人员创造安全、舒适、温馨、和谐的接种环境。使得人员的积极性和主动性得到提高[6]。同时需要适当增加预防接种点，适当增加服务的时间，最好形成天天运转的模式，最大程度的满足不同人群的接种需求。同时还可以利用短信、电话、微信、微博、QQ等方式，向家长传播接种信息。②加大力度对家长进行宣传。很多家长，尤其是偏远落后的农村地区，文化程度较低，对疫苗接种没有基本的认识，使得这些家长以后能够主动的配合接种工作。同时还可以通过发放宣传单、电子屏幕等方式，对疫苗接种进行宣传 [7]。③加大力度对工作人员进行教育和培训，加大力度对工作人员进行业务培训，使得每个工作人员均能提高自己的责任感，从而对适龄儿童的接种情况了如指掌，这样才能开展查漏补种工作。一类疫苗接种具有重要的意义，工作人员不能忽视，也不能一味的推广二类疫苗接种。尽可能的提高一类疫苗接种率的前提之下，向广大家长介绍和推广二类疫苗接种。另一方面，需要对种门诊运转情况、安全接种情况、疫苗使用情况、冷链管理情况进行督导，如果发现问题必须要进行整改，最大程度的提高疫苗接种率，提高儿童的身心健康[8]。

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基因工程疫苗例6

灭活疫苗出现的较晚。制作疫苗的方法一般采用肉汤培养物。稍后改用琼脂表面培养物。杀菌方法多采用加热杀菌法，疫苗的含菌量以湿重计算。最早研制的灭活疫苗是用加热杀死的猪霍乱沙门是杆菌制成的疫苗(1884~1886)，免疫鸽子后被免疫的鸽子获得了免疫保护，能耐受强毒猪霍乱沙门氏杆菌的攻击。但数量有限，效果欠佳。

人们在研究减毒苗的时候发现活疫苗由于残留强毒和弱毒反强的危险，又重新研制灭活疫苗，尤其当有了理想的免疫佐剂之后，种类不断增加，如猪丹毒灭活氢氧化铝疫苗、禽霍乱灭活氢氧化铝疫苗等。特别是以轻质矿物油为佐剂的油佐剂灭活苗，由于免疫期长，十分安全，无副作用而深受用户的青睐，其发展前景非常广阔。

免疫血清的研究

在免疫血清研究方面，贝林和北里二氏(1890)发现破伤风毒素免疫的动物血清中有中和相应毒素的能力，卡尔默特(1894)研制成功了抗蛇毒血清，并开辟了血清疗法，为制备各种免疫血清提供了根据。

由于免疫血清有产量小、价格贵、免疫保护期短等特点，而不能大面积推广。目前只有抗破伤风血清用量最大。人们常利用成年禽类(鸡、鸭、鹅)等同种动物或一种动物(猪、牛、羊)制备高免血清，用以防治畜禽传染性疾病并取得了良好的效果。同时也给成年禽类进行超免处理后采集所产生的蛋，制成超免卵黄抗体来防治这些疾病效果也极其显著。跨入20世纪，兽医生物制品取得了迅猛发展。卡尔默特和介林二氏(1923)研制成功了卡介苗；威尔斯提德(1923)发明了铝胶佐剂；拉蒙(1923)利用加热与甲醛溶液处理毒素，可使其脱去毒力类毒素，利用类毒素免疫动物同样获得免疫保护；拉蒙和施米德二氏(1936)，以及福罗德(1935)分别研究了明矾、氢氧化铝和矿物油的佐剂效应，对兽医生物制品起到了极其重要的促进作用。伍德拉夫和古德帕斯特(1931)在鸡胚内复制痘病毒获得成功，以及后来的组织与细胞培养复制病毒，为病毒疫苗的研究进入一个较高层次奠定了基础。这一时期，疫苗的生产仍处于手工操作阶段，但产量逐步扩大，质量也不断改进。

从20世纪50年代开始，疫苗的生产发生了巨大的变革。近30年来，特别是60年代以后，随着基础科学的发展与进步，推动了微生物学与免疫学的研究促进了兽医生物制品生产的大发展，无论数量与质量上都有很大提高，由于发酵工业的兴起，带动了疫苗生产向工业化规模发展。同时由于各种抗菌药株的产生，使得已经停产多年或被重视的疫苗又重新受到重视，亦取得了重大的成就。

我国兽医生物制品发展现状

兽医生物制品是控制和消灭畜禽传染病的重要武器，对畜牧业经济的发展，保障人民生命健康具有重要意义。我国兽医生物制品的研究，从1928年起虽然开始作了一些工作，但政府极不重视支持，解放前此方面工作进展缓慢，疫病不能控制，听其自然。新中国建立后，新政府对动物免疫工作日渐重视。经过60余年的发展，我国已建立了具有一定规模与水准的兽医生物制品厂25家，共生产猪、禽、牛、羊、马、经济动物、犬、猫和鱼类疫苗系列100余种，基本上满足了国内需要，有的疫苗在国际上享有盛誉，如猪瘟兔化弱毒疫苗和马传染性贫血疫苗等。

兽医生物制品的发展趋势

1第二代疫苗—基因工程疫苗

百余年来，虽然疫苗的生产不断改进与创新，但就其性质来说，仍然属于第一代疫苗。自基因工程技术引进疫苗研究领域之后，使疫苗的研究与生产发生了革命性变化，于是便产生了第二代疫苗—基因工程疫苗。在兽医领域已研制了口蹄疫基因工程疫苗和犊牛、仔猪下痢大肠杆菌基因工程疫苗。

基因工程疫苗的载体已由质粒改为痘病毒，并可将几种基因片段重组在一个痘病毒的载体，并可将几种基因片段重组在一个痘病毒的载体上产生一种基因工程联合疫苗，使制造疫苗的技术又向前迈进了一大步。

2合成肽疫苗

合成肽疫苗为第三代疫苗。具有抗原性的肽段完全用生物化学的方法进行人工合成后，再与高效的免疫佐剂相配合制成疫苗，其特点是，可以大量人工合成，并且抗原性专一，无副作用。这种疫苗的生产是由基因工程阶段进入了分子工程阶段，是高科技产品，它将代表着21世纪生物制品的发展方向。

基因工程疫苗例7

摘 要：正在研制的口蹄疫新型疫苗有10多种，分别是纳米微球黏膜免疫疫苗，表位肽疫苗、口蹄疫O型复合表位蛋白疫苗、A型重组毒株（Re-A/WH/2009）的口蹄疫O型、A型、亚洲Ⅰ型三价灭活疫苗、猪口蹄疫O型广谱基因工程病毒灭活疫苗、口蹄疫O型标记疫苗、猪O型Mya98毒株空衣壳疫苗、猪口蹄疫O型合成肽疫苗（多肽2600+2700+2800）、牛口蹄疫（O型、Asia1型）二价合成肽疫苗、以及口蹄疫病毒活载体疫苗。其中取得突破性进展的有5种，牛口蹄疫（O型、Asia1型）二价合成肽疫苗PD50值大于6.0，免疫持续期为6个月，保存期为12个月，已完成所有实验室研究和临床试验，申请了新兽药注册并已通过初审；猪口蹄疫O型合成肽疫苗（多肽2600+2700+2800）PD50值大于6.0，免疫持续期为6个月，保存期为12个月，已完成所有实验室研究和临床试验，现已申请新兽药注册并通过复核试验和复审；含A型重组毒株（Re-A/WH/2009）的口蹄疫O型、A型、亚洲Ⅰ型三价灭活疫苗PD50值大于6.0，免疫持续期为6个月，保存期为12个月，获得了农业部新兽药注册证书，实现了产业化；猪口蹄疫O型广谱基因工程病毒灭活疫苗已申报农业部临床试验批文；口蹄疫O型标记疫苗已完成疫苗质量研究，并已申请新兽药注册。其他疫苗研究也均取得了程度不等的进展。利用反向遗传操作技术平台，获得基因工程修饰病毒疫苗株5株：（1）rV-STN-5；（2）9O/rV-1；（3）Re-A/WH/2009；（4）Re-Mya/98/BY/2010；（5）Re-Asia1/HN/2006。利用基因克隆、重组等技术，获得其他基因工程修饰病毒9株，分别为：（1）表达O型FMDV不同亚型主要免疫原性基因的重组伪狂犬病毒1株；（2）共表达O-A-Asia1型FMDV主要免疫原性基因的重组伪狂犬病毒1株；（3）表达FMDV免疫原性基因的杆状病毒2株；（4）表达猪源IFN-α/IFN-γ和A型FMDV P1基因的重组杆状病毒3株；（5）表达口蹄疫和小反刍兽疫病毒主要保护性抗原基因的重组羊痘病毒2株。成功研制CpG-IFN、CpG-IL4以及多磷腈和CpG DNA等生物复合佐剂3种，纳米乳油佐剂、纳米粒IL-2佐剂以及多孔硅和上转换荧光纳米材料的载药系统等纳米复合佐剂材料4种，以及IL-2、IL-4和IFN-γ等多种哺乳动物细胞表达质粒和多糖类免疫增强剂4种。

关键词：口蹄疫 病毒 新型疫苗 基因工程修饰病毒疫苗株 免疫佐剂

Abstract：More than 10 kinds of the new type vaccines is developing. There are 5 kinds of the new vaccine made in major progress. The first one is bivalent synthetic peptide vaccine of FMD type O and type Asia1， the second one is synthetic peptide vaccine in pig of FMD type O（peptide 2600+2700+2800）， the third one is type A recombinant strains （Re-A/WH/2009） of type O、type A and type Asia1 trivalent inactivated vaccine， the fourth one is the marker vaccine of FMD type O， and the last one is broad-spectrum inactivated virus gene engineering vaccine in pig of FMD type O. The first four vaccines were all safe to the animals， PD50 values were greater than 6.0， the vaccine immune duration is 6 months， the shelf life of synthetic peptide vaccine is 12 months， and all has applied for a new veterinary drug registration. The first one has completed all laboratory studies and clinical trials， and has passed the preliminary examination for new veterinary drug application. The second one has completed all laboratory studies and clinical trials， and has passed the inspection test and review. The third one has got the new veterinary drugs registration certificate， and realized industrialization. The last one has applied clinical trial. Varying degrees of progress has been made in other vaccine research. With the reverse genetics technology platform， five genetically engineered vaccine candidate of FMDV were screened and constructed， which were rV-STN-5， O/rV-1， Re-A/WH/2009， Re-Mya/98/BY/2010 and Re-Asia1/HN/2006. Using gene cloning and recombination technology， other nine genetically engineered vaccine candidate of FMDV were constructed， respectively is：（1） PRV TK-/gE-/PanP12A-P1；（2） PRV TK-/gG-/OAY；（3） Two recombinant baculovirus which expressing the immunogenicity gene of FMDV；（4） Three recombinant baculoviruses which expressing interferons alpha/IFNCgamma of porcine and P1 gene of FMDV type A；（5） Two restructuring goatpox viruses which expressing the major protective antigen gene of FMDV and small ruminants virus. Three biological compound adjuvants containing CpG-IFN， CpG-IL4， multi-phosphonitrile and CpG DNA， four nano composite adjuvants including Nano EC adjuvant， nanoparticle adjuvant IL-2， and drug-loaded system of porous silicon and upconversion fluorescence nanomaterials， four mammalian cell expression plasmids which can expressing IL-2， IL-4 and IFN-γ as well as polysaccharides immunopotentiator have successfully developed.

Key Words：Foot and mouth disease virus；New type vaccine；Genetically engineered vaccine candidate；Immunologic adjuvant

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基因工程疫苗例8

中图分类号：S851.3 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2013）09-0063-02

我国是世界生猪养殖大国，2009年全国生猪存栏约4.7亿头，出栏6.45亿头，猪肉产量4 889万t，位居世界第一。随着我国养猪业的不断发展，做好猪的防疫免疫工作显得尤为重要，这就需要促进猪用疫苗产品和市场的发展。现将我国主要猪用疫苗产品的种类和厂商简要介绍如下。

1 猪用疫苗的种类

我们通常所说的疫苗包括疫苗、菌苗、虫苗等预防用兽用生物制品。疫苗是利用病毒经除去或减弱它对动物的致病作用而制成，菌苗是利用病原细菌经除去或减弱它对动物的致病作用而制成，虫苗是利用病原虫体除去或减弱它对动物的致病作用而制成。

疫苗和菌苗分弱毒苗和灭活苗两种。弱毒苗是利用毒力减弱的细菌或病毒等微生物经大量繁殖后制成的活苗。其特点是产生免疫快、效果好、用量小、免疫期长，不需要使用佐剂，而且接种途径多，使用比较方便，还可用于紧急接种，缺点是保存期较短，需低温冷藏。灭活苗是将病原微生物大量繁殖后，采用物理的或化学的方法使其失活，但仍保留其免疫原性制成的疫苗即灭活苗，又称死苗。其特点是安全性好，不散毒，不受母源抗体的干扰，不需低温保存，缺点是产生免疫力比较慢、免疫期短、用量较大、价格较高，只能肌肉或皮下接种。

猪用疫苗主要包括弱毒活疫苗、灭活疫苗。弱毒活疫苗有猪瘟兔化弱毒疫苗及猪蓝耳病弱毒疫苗等，灭活疫苗有O型猪口蹄疫灭活疫苗和猪气喘病灭活疫苗等。在这些基础疫苗基础上，还有多价疫苗、联合疫苗、基因缺失疫苗等。多价疫苗是指将同一种细菌或病毒的不同血清型混合而制成的疫苗，如猪链球菌病多价血清灭活疫苗和猪传染性胸膜肺炎多价血清灭活疫苗等。其特点是对多血清型的微生物所致疫病的动物可获得完全的保护力，而且适于不同地区使用。

联合疫苗是指由两种以上的细菌或病毒联合制成的疫苗，如猪丹毒、猪巴氏杆菌二联灭活疫苗和猪瘟、猪丹毒、猪巴氏杆菌三联活疫苗。其特点是接种动物后能产生相应疾病的免疫保护，减少接种次数，使用方便，打一针防多病。但当前在猪病的免疫预防上还是使用单苗免疫效果好，多联苗免疫效果不确切，尽可能少用。

基因缺失疫苗是用基因工程技术将强毒株毒力相关基因切除后构建的活疫苗，如伪狂犬病毒TK-、gE-、gG-缺失疫苗。该疫苗的特点是安全性好，不易返袓；免疫原性好，产生免疫力坚实；免疫期长，尤其是适于局部接种，诱导产生黏膜免疫力。

除此之外，还有类毒素疫苗、亚单位疫苗、基因工程重组活载体疫苗、核酸疫苗、合成肽疫苗、抗独特型疫苗及转基因植物疫苗等，部分有待于进一步开发，才能用于猪病的防制实践。

2 我国猪用疫苗产品生产与主要厂商

截至2009年底，我国已有兽用生物制品生产企业78家，正常生产的企业69家。这69家企业共生产猪用疫苗48个品种，销售额19.27亿元，占全部兽用生物制品销售额的37%。其中猪用强制免疫产品销售17.49亿元，猪用常规免疫产品销售1.78亿元。销售猪用疫苗53.05亿头份（亿毫升）（表1），其中活疫苗31.86亿头份（组织毒活疫苗10.05亿头份，细胞毒活疫苗13.31亿头份，细菌活疫苗8.5亿头份）。

基因工程疫苗例9

中图分类号：R186文献标识码：B文章编号：1005-0515（2011）3-330-02

我国是乙型肝炎发病大国，乙肝不仅严重影响人体健康，而且给家庭给社会造成沉重的经济负担，乙肝是贫困地区因病致贫、因病返贫的一个重要因素，乙肝病人和乙肝病毒携带者在入托、入学、就业、婚姻等方面都受到不同程度的影响，引起一系列的社会问题。2005年经国务院批准，卫生部和财政部已联合下发了“将乙肝疫苗纳入儿童计划免疫的通知”，乙肝疫苗成为继卡介苗、白百破、麻疹疫苗、小儿麻痹糖丸之后，又一种纳入全国儿童计划免疫的疫苗。为了全面落实乙肝疫苗接种纳入计划免疫工作，提高儿童乙肝疫苗接种率，控制乙肝的发病率，我市开展了乙肝疫苗查漏补种工作。

1 资料及方法

1.1 一般资料 2006年1月1日－2010年6月30日出生的所有未接种乙肝疫苗、或未完成乙肝疫苗全程免疫的儿童。

1.2 方法 采用统一印制的《HepB接种情况调查表》，集中培训调查人员，详细询问调查对象，对调查结果进行分析统计；对接种史不详、无接种证的儿童按未接种乙肝疫苗进行补种。

2 结果

本次乙肝疫苗查漏补种儿童总数38724人，其中流动儿童4953人，无免疫接种史儿童2709人。乙肝疫苗接种率93%，首针及时接种率82%，全程免疫率89.3%。

乙肝疫苗漏种原因:(1)未完成乙肝疫苗的全程免疫主要原因:①接种地点太远占20.13%;②流动或超生儿童占16.71%;③接种费用高占16.24%;④儿童患病未去接种占14.45%;⑤不知道要接种占12.04%;⑥不知道要进行2、3次接种占9.87%;⑦对接种缺乏信任占4.67%;⑧认为没有必要接种占3.87%;⑨其他占2.02%。(2)未及时接种乙肝疫苗的各主要原因:①出生地无接种条件(含在家里生)占21.87%;②计划外生育或流动儿童占17.97%;③经济困难占14.82%;④基层医院妇产科未开展此项工作占12.26%;⑤不知道要接种占11.87%;⑥家长认为接种乙肝疫苗不重要占10.54% ;⑦新生儿患病未及时接种占7.64%;⑧无疫苗供应占1.65%;⑨其他占1.38%。

3 讨论

通过这次对儿童乙肝疫苗查漏补种工作发现了以下问题：(1)个别教育部门和一些幼儿园对该项工作的配合不够。(2)有些接种门诊对大年龄组儿童接种的原始资料有遗失，给接种史的追溯带来很大的困难。(3)部分接种单位摸底调查和查漏补种工作进展缓慢或不够深入。(4)流动儿童家长对乙肝疫苗免疫史回忆不清者较多。(5)部分家长在接到告知单后应答率低，卫生部门反复催促，效果仍不理想。(6)民办幼儿园大部分是流动儿童，存在“三不管”现象，是免疫规划的空白区。

为确保乙肝疫苗纳入计划免疫工作顺利实施，我市有关部门应做好以下工作：(1)地方各级政府要加强部门之间的协调、配合，财政部门要落实相应的经费，卫生部门要落实相应的人员、场地，做好工作衔接。本着谁接生、谁负责接种首针乙肝疫苗的原则，妇幼保健机构、有产科的医疗机构要积极配合做好新生儿乙肝疫苗的首针接种工作以及第二针的转卡衔接工作，各接种门诊更应做好新生儿的第二、第三针的全程接种和统计上报工作。(2)同时各地公安部门、街道居委会也要配合做好流动人口的管理登记工作，向疾病控制部门提供流动人口的线索，以便及时掌握流动儿童动态，尽力做到一个不漏地给予免费接种，对于流动儿童要一视同仁，共同享受免费接种的权利。(3)采取恰当形式（如新闻机构的介入）通知广大儿童家长及时带领孩子到居住地所在的接种门诊进行乙肝疫苗的全程接种。

几点建议：(1)由于对群众缺乏针对性的宣传活动，群众对乙肝疫苗接种工作的认识不足；普遍基层防疫人员年龄老化，加上目前基层医务人员工作量大，任务重、培训次数少，针对性不强，完成全程接种工作难度大，因此要通过与医院、计生等多部门的合作与交流，以孕妇为重点，加大宣传力度，加强乙肝防治知识覆盖面，切实提高我区孕产妇的住院分娩意识，提高住院分娩率，从而提高首针及时接种率。(2)乙肝疫苗接种工作在狠抓首针及时接种率的同时，还应大力开展健康教育，加强流动儿童计划免疫管理[1]，使儿童家长变被动接种为主动接种，促进目标人群及时接种和全程接种行为的形成。(3)我市全程接种率89.3%，还不是很高，因此要加强预防接种的规范化管理工作，充实基层防疫队伍，加强宣传培训力度，加大督导力度及完善考核机制；解决相关工作经费，提高基层防疫人员的工作积极性。(4)加强常规免疫接种工作及开展查漏补种工作，提高全程免疫接种率，力争使我市全程接种率达100%。

要做好接生单位，特别是在家分娩儿童的首针接种以及首针与第2,3针的衔接，同时大力开展健康教育，加强关于乙肝危害性及其可预防性知识的宣传，尤其要加强对流动儿童计划免疫管理，同时也要加强基层卫生工作人员的业务培训，规范计划免疫工作，实行预防接种人员资格证制度[2]，对预防接种人员进行培训合格上岗，提高基层预防接种人员的理论知识和业务水平，为更好地完成计划免疫工作，提高全民健康水平作贡献。

基因工程疫苗例10

畜禽疫苗接种动物后可使动物获得

针对某种传染病的特异抵抗力，防

止动物发病和感染。在动物传染病

防治中，用疫苗免疫动物是提高动

物机体免疫力、预防动物疫病发生

和流行的关键措施。好的疫苗免疫

保护率可达95%以上，当然疫苗保

护率还受到免疫时机、动物健康状

况、免疫方法、免疫剂量和免疫程

序等因素的影响。

1 疫苗的种类和特点

目前，市场上的疫苗可以分为活疫苗、

灭活疫苗、多肽疫苗、基因工程疫苗等四大

类。

1.1 活疫苗即称弱毒疫苗，是利用从自然界

分离到的天然弱毒株或经过人工致弱的毒株

制造的疫苗，弱毒疫苗的毒力已经不能引起

动物发病，但仍然保持着原有的免疫原性，

并能在体内繁殖。因此，可用较少的免疫剂

量诱导动物产生较强的免疫力，具有免疫期

长、不影响动物产品品质等优点。活疫苗需

要低温保存，为了延长保存期，常采取冻干

保存又称冻干疫苗。目前，我国用于预防重

大动物的活疫苗有猪瘟、新城疫、炭疽、布

鲁氏菌病等弱毒疫苗。

1.2 灭活疫苗是把病原微生物经理化方法灭

活后制造的疫苗，灭活后的病原微生物仍然

保持免疫原性，接种后使动物产生特异性免

疫力，这种疫苗又称为死疫苗。通常采用白

油佐剂，又称油佐剂疫苗。目前，我国用于

预防重大动物疫病的灭活疫苗有高致病性禽

流感、口蹄疫、高致病性猪蓝耳病等灭活疫

苗。

1.3 合成多肽疫苗是通过化学合成法人工合

成病原微生物的保护性多肽，再加入佐剂制

成的疫苗。

1.4 基因工程疫苗基因工程疫苗是用分子生

物学技术对病原微生物的基因组进行改造，

以降低其致病性，提高其免疫原性，或者将

病原微生物基因组中的一个或多个对预防疫

病有用的基因克隆到无毒的原核或真核表达

载体上制成的疫苗。

2 疫苗的保存和运输

2.1 疫苗的保存疫苗种类不同，要求的保存

条件也不一样。严格按照要求保存疫苗。活

疫苗在冷冻室-20℃以下保存，灭活疫苗在

冷藏室2～8℃保存。

2.2 冻干疫苗大量运输时应采用冷藏车运

输，少量运送时可以采用冷藏箱（包）或保

温桶加冰块。灭活疫苗大量运输时应采用恒

温车运输，冬季要防冻，夏季要防阳光照

射。少量运输时可以使用冷藏箱（包）。

3 免疫接种前的准备工作

3.1 免疫物品的准备：注射器、连续注射

器、针头、镊子、搪瓷盘、疫苗、疫苗稀

释液、疫苗冷藏箱、冰块、牛鼻钳、保定

架、免疫登记表、免疫户口册、耳标及耳标

钳等。消毒药品：75%酒精、2%～5%碘酊

等。

3.2 注射器、针头的清洗与消毒冲洗。灭菌

（即纱布包好的注射器、针头放入高压灭菌

器中，121℃高压灭菌15分钟）或煮沸消毒，

放入钢精锅或铝锅内，加水淹没物品2厘米以

上，煮沸15～30分钟，禁止使用化学药品消

毒。

4 疫苗的准备

4.1 检查疫苗，冻干疫苗凡发现疫苗瓶裂、

瓶盖松动、失真空、超过有效期或标签不完

整一律不得使用。油佐剂灭活疫苗除检查有

效期外，还需检查色泽是否正常，有无沉

淀、破乳等变化。

4.2 灭活疫苗的预温与震荡，使用前，从冰

箱中取出疫苗，置于室温(25℃左右)2小时左

右，平衡疫苗温度。使用前轻轻震摇。

4.3 吸取疫苗，轻轻震摇，使疫苗混合均

匀；用75%酒精棉球消毒疫苗瓶瓶塞；将注

射器针头刺入疫苗瓶，抽取疫苗；排除针管

中的空气，排气时用棉球包裹针头，以防疫

苗溢出，污染环境；使用连续注射器时，不

需抽取疫苗，把注射器软管连接的长针插至

疫苗瓶底即可，同时插入另一针头供通气

用。

5 免疫接种方法

为保证动物在接种疫苗后产生预期的免

疫效果，应在使用疫苗时，掌握疫苗的正确

接种方法。每种疫苗都有其特定免疫程序和

最佳的接种途径，如弱毒疫苗应尽量模仿自

然感染途径接种，灭活疫苗均应皮下或肌肉

注射接种。

5.1 家禽免疫接种方法，家禽接种的主要途

径有饮水、滴鼻点眼、气雾、刺种、涂肛、

皮下注射和肌肉注射等。

饮水免疫法根据禽群的饮水量计算用水

量，将可供口服的疫苗3倍剂量溶于水中，装

入饮水器或供水桶内，供禽群自由饮用，2小

时内饮完。饮水免疫应注意：疫苗剂量要加

大，一般2～4倍为宜。因为禽类饮水时，会

损失一部分；稀释疫苗不能用金属容器，稀

释疫苗的饮水不能用自来水，自来水含有消

毒剂，会使疫苗失活，可用蒸馏水、无离子

水或深井水，为了保护疫苗，也可在饮水中

添加0.1%的脱脂奶粉；饮水器要充足，以保

证禽只在短时间内饮到足够的疫苗；服用疫

苗前应停止饮水2～4小时（时间长短视天气

而定）以便使禽只能尽快而又一致地饮用疫

苗，饮水时间应控制在2小时以内；稀释疫苗

的用水量要适当（约为饮水量的120%）；免

疫前后3天内，饮水中不能用消毒药。滴鼻

点眼免疫法使疫苗从呼吸道进入体内，对于

幼雏禽可避免或减少疫苗病毒被母原抗体中

和，可刺激其产生局部免疫，效果好，是最

好的免疫方法之一，适用于新城疫Ⅱ系、Ⅳ

系、CL30疫苗等疫苗的免疫，新城疫首免一

般应用此法。皮下注射皮下注射宜在颈背部

后1/3处。肌肉注射家禽肌肉注射免疫一般

将疫苗注射到胸部、腿部肌肉或翅根肌肉。

5.2 家畜免疫接种方法家畜接种的途径有皮

下注射和肌肉注射等，每种疫苗均有其最佳

的接种途径。

一是皮下注射法，宜选择皮薄、被毛

少、皮肤松弛、皮下血管少的部位。牛、羊

宜在颈侧中1/3部位，猪宜在耳根后或股内

侧，犬宜在股内侧。左手拇指与食指捏取颈

侧下或肩胛骨的后方皮肤，使其产生褶皱，

右手持注射器针管在褶皱底部倾斜、快速刺

入，缓缓推药，注射完毕，将针拔出，立即

以药棉揉擦，使药液散开。二是皮下注射

时，平行皱折插针，以防刺穿皮肤，注射到

皮外。三是肌肉注射法注射部位应选择肌肉

丰满，血管少，远离神经干的的部位。牛、

羊宜在颈部或臀部，猪宜在耳后颈部或臀

部，犬宜在颈部。肌肉注射时，进针方向要

与注射部位的皮肤。

参考文献

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意的问题[J]. 山东畜牧兽医,2010,12:47-49

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用畜禽疫苗应注意的问题[J]. 广东畜牧兽医科