关键词：铁线莲属 反应体系优化 遗传多样性 

摘要：对铁线莲属(Clematis Linn.)植物基因组DNA的ISSR-PCR反应体系进行了优化,并采用ISSR分子标记对32个铁线莲属植物(包括8个野生种、1个变种和23个品种)及2个近缘属植物的遗传多样性进行研究。结果显示:铁线莲属植物基因组DNA ISSR-PCR最佳反应体系的总体积为25.0μL,包括40 ng·μL^-1模板DNA 1.0μL、0.4μmol·L^-1引物1.0μL、0.15 mmol·L^-1dNTPs 2.0μL、10×Ex Taq Buffer(Mg2+ Plus) 2.0μL、TaKaRa Ex Taq酶0.2μL和ddH2O 18.8μL。对32个铁线莲属植物及2个近缘属植物基因组DNA的ISSR-PCR分析结果显示:共扩增出172个条带(位点),平均每条引物扩增出13.2个位点,其中,多态性位点168个,平均每条引物扩增出12.9个多态性位点,平均多态性位点百分率为98.2%。聚类分析结果显示:32个铁线莲属植物及2个近缘属植物的遗传距离在0.22~1.21之间。在遗传距离1.02处,将32个铁线莲属植物分为3个大组,‘杰出’(‘Superba’)单独聚为1个大组,‘斯托尔韦克’(‘Stolwijk Gold’)和‘柠檬之梦’(‘Lemon Dream’)聚为1个大组,其余植物聚为第3大组;在遗传距离0.92处,将第3大组进一步划分为3个亚组,第1亚组包括‘阿迪森’(‘Addisonii’)、‘帕斯卡’(‘Pascal’)和‘樱桃唇’(‘Cherry Lip’),第2亚组包括短柱铁线莲(C.cadmia Buch.-Ham. ex Wall.)、灰叶铁线莲[C.canescens(Turcz.) W. T. Wang et M. C. Chang]、毛蕊铁线莲(C.lasiandra Maxim.)、曲柄铁线莲(C.repens Finet et Gagnep.)、‘铃儿响叮当’(‘Jingle Bells’)和‘雀斑’(‘Freckles’),第3亚组包括吴兴铁线莲(C.huchouensis Tamura)等20个铁线莲属植物;在遗传距离0.77处,将第3亚组划分为7个小组。研究结果表明:ISSR分子标记能够应用于铁线莲属植物的遗传多样性分析。

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