关键词：重组 遗传 热休克蛋白质70 cea启动子 腺病毒 

摘要：目的构建癌胚抗原（CEA）启动子驱动下靶向表达热休克蛋白70（HspTO）基因的重组腺病毒。方法通过RT-PCR和PCR的方法分别扩增人Hsp70基因和CEA启动子，构建穿梭质粒pDC316-pCEA—Hsp70。将所得的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒共转染293细胞获得重组腺病毒Ad5-pCEA—Hsp70。通过梯度离心纯化病毒，采用半数细胞培养物感染量测定病毒滴度。分别以重组的腺病毒感染CEA阳性的人胰腺癌BxPC3细胞和CEA阴性的SWl990细胞，通过RT-PCR和ELISA法检测Hsp70 mRNA和蛋白的表达。结果酶切和测序证实Hsp70基因和CEA启动子成功插入PDC316质粒。与骨架质粒共转染293细胞获得的病毒经PCR扩增证实重组腺病毒构建成功。最终获得的病毒颗粒数达2．2×10^11vp／ml，滴度为1．5X10^10PFU／ml。重组腺病毒感染CEA阳性表达的BxPC3细胞后，可显著增加Hsp70 mRNA和蛋白的表达，而感染CEA阴性的SWl990细胞，Hsp70mRNA和蛋白的表达无变化。结论成功构建了能够在CEA阳性细胞中靶向表达Hsp70基因的重组腺病毒Ad5-pCEAHsp70，为进一步研究奠定了基础。

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