关键词：足细胞 细胞凋亡 nephrin 信号转导 

摘要：目的研究nephrin在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导足细胞凋亡中的作用，以及可能的分子机制。方法体外培养永生化小鼠足细胞（MPC），以不同浓度AngⅡ处理MPC和10μmol／LAngⅡ刺激不同时间，用流式细胞仪检测细胞凋亡率；实时定量PCR、免疫荧光和Western印迹法检测nephrin的表达和分布；Western印迹法检测Akt磷酸化水平。脂质体法转染pcDNA3．1-mNPHS1质粒，G418筛选稳定转染细胞系。用Akt抑制剂LY294002或与AngⅡ共孵育刺激MPC和pcDNA3．1-mNPHSl转染细胞，检测Akt磷酸化水平和细胞凋亡率。结果（1）AngⅡ以剂量和时间依赖方式诱导MPC凋亡。AngⅡ受体拮抗药氯沙坦与AngⅡ共孵育18h，显著降低AngⅡ单独刺激的足细胞凋亡率（P〈0．05）。（2）10μmol／LAngⅡ刺激12h后，nephrinmRNA和蛋白较对照组显著降低，24hnephrinmRNA约为正常对照的50％（P〈0．05）。正常足细胞nephrin主要分布于核膜周围的胞质和细胞膜，随刺激时间延长，胞膜和胞质neDhrin表达逐渐降低。（5）10μmol／LAngⅡ刺激15min后，Akt磷酸化显著降低，约为正常对照细胞的50％（P〈0．01）。（4）AngⅡ与LY294002共孵育12h后，细胞凋亡率显著高于AngⅡ和LY294002单独刺激（均P〈0．05）。（5）pcDNA3．1-mNPHSl稳定转染显著上调足细胞Akt磷酸化水平（P〈0．05），抑制AngⅡ诱导的细胞凋亡（P〈0．05）。结论AngⅡ通过AngⅡ受体诱导小鼠足细胞凋亡，抑制足细胞nephrin表达。nephrin通过P13K—Akt信号通路调节足细胞存活状态。

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