副鸡禽杆菌外膜蛋白抗体间接 ELISA检测方法的建立

关键词：副鸡禽杆菌 抗原蛋白 p9 间接 elisa 

摘要：副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum,Apg)是鸡传染性鼻炎的致病菌,可以引起急性呼吸道病,可导致蛋鸡产蛋率下降、从而造成严重的经济损失。副鸡禽杆菌引起的症状与鸡毒支原体等病原引起的其他上呼吸道传染病非常相似,本试验利用副鸡禽杆菌外膜蛋白,建立间接 ELISA 抗体检测方法,用于血清抗体的检测。通过分析副鸡禽杆菌外膜蛋白HMTp210中较为保守的P9片段,将其进行原核表达并纯化,纯化的P9蛋白免疫鸡制备了抗血清。结果显示,P9蛋白分子量62Ku,纯度80%以上。以纯化的蛋白P9作为包被抗原,采用棋盘滴定法确定了抗原最佳包被浓度为1μg/Ml、血清样品最佳稀释度为1∶100,作用时间为 60min;酶标二抗的最佳稀释浓度为1∶10000,最佳作用时间为 30min;底物显色时间为15 min;阴、阳性的判定值为0.3。按上述条件建立的间接ELISA方法可以检测出P9蛋白免疫后的鸡血清及三种血清型副鸡禽杆菌的阳性鸡血清,与其他禽病病原体抗血清无交叉反应,本研究为检测副鸡禽杆菌血清抗体提供了一种新的方法。

中国兽医杂志要求:

{1}优先刊发创新性学术论文及依托国家级、省级科研立项课题的研究成果。

{2}本刊实行三审定稿制，取舍稿件重在学术水平。

{3}参考文献要精选，以不少于5篇为宜。引用文献中书刊的层次、数量、出版年份要仔细挑选核实，尽量引用出版年份较新的期刊论文、书籍、论文集。

{4}摘要：提取文章的主要观点，独立成段，一般在300字以内。

{5}第一作者和通信作者简介包括：姓名、工作单位、职务职称、专业领域、通讯地址、邮政编码、联系电话（包括手机）、E-mail 地址等。

注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社