抗牙龈卟啉单胞菌卵黄免疫球蛋白的制备、鉴定及理化特性分析

关键词：紫单胞菌 龈 免疫球蛋白类 动物 实验 

摘要：目的制备牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）的卯黄免疫球蛋白（immunoglobulin yolk，IgY）并评价其理化性质，以期为采用被动免疫抗体防治慢性牙周炎寻找新途径。方法厌氧培养聘国际标准菌株ATCC33277，收集细菌，超声振荡至菌体完全破碎，离心，收集上清液，即为全菌可溶性蛋白抗原。罗曼母鸡隔离饲养至5个月龄用于抗体的制备。以质量浓度为1g／LPg全菌可溶性蛋白抗原1ml与等量弗氏完全佐剂吹打混匀成油包水状注射剂，经皮下和肌肉多点注射免疫母鸡，共注射免疫4次，每次免疫间隔时间为10d。初次免疫即开始收集鸡蛋，标记后4℃保存。提纯免疫后不同时间的抗Pg-IgY，二喹啉甲酸总蛋白定量法测定蛋白浓度，SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鉴定，间接酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法进行IgY抗体效价变化和理化性质的检测。结果通过免疫诱导出质量浓度为2．05g／L的特异性IgY，经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测得相对分子质量分别为65000的重链和25000的轻链，与理论值一致；间接ELISA法结果显示初次免疫后5d左右出现抗Pg-IgY，免疫后50～55d达峰值；抗体效价达到1：100000以上；一个鸡蛋可以生产超过10mg的IgY，纯度高达95％。结论Pg全菌蛋白免疫产蛋母鸡可使鸡蛋产生高效价、高浓度的特异性IgY，该抗体纯度高、耐热、耐酸碱，理化性质稳定，适合口腔环境。

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