关键词：鸦胆子素 细胞凋亡 癌 非小细胞肺 h460细胞 

摘要：目的考察鸦胆子素A(BA)对人非小细胞肺癌细胞系H460细胞凋亡的影响和作用机制。方法用BA对H460细胞进行处理,采用MTT法检测细胞增殖情况,并利用Annexin V-FITC/PI双染法检测BA对H460细胞凋亡的影响。Hoechst 33342染色和免疫荧光染色观察细胞凋亡时染色质的凝集以及DNA损伤标志蛋白γ-H2AX表达情况。Western blot和RT-PCR检测H460细胞内凋亡相关蛋白表达水平。结果MTT结果表明,与对照组相比,BA能显著抑制H460细胞增殖。对A549、H1299、H1355三株非小细胞肺癌细胞系进行抑制增殖作用检测,结果显示BA对三株细胞系均有不同程度抑制作用。BA作用48h后,各浓度BA处理H460细胞凋亡率均高于对照组,具有时间依赖性,差异具有统计学意义。BA处理组可见明显的染色质凝集,细胞核碎片化,DNA损伤标志蛋白γ-H2AX表达明显增加。Western blot结果显示,BA作用48h后,促凋亡蛋白Bax表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,与对照组相比,Bax/Bcl-2比值显著升高。同时与对照组相比,凋亡通路中的cleaved caspase-9、cleaved caspase-3表达明显增加,并引起凋亡标志蛋白PARP切割。RT-PCR结果显示,BA处理H460细胞后,与对照组相比,Bcl-2基因表达显著降低。结论BA能抑制人非小细胞肺癌细胞株H460细胞增殖,显著诱导其凋亡,该作用与BA引起DNA损伤并激活线粒体凋亡通路有关。

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