关键词：猪繁殖与呼吸综合征 sybr 实时荧光定量pcr 

摘要：本研究根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,设计出一对引物,建立了检测该病毒的SYBR GreenⅠ染料荧光定量PCR方法。此法特异性高,与猪流行性腹泻(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、塞内卡谷病毒(SVV)、脑心肌炎病毒(EMCV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应;采用不同滴度的PRRSV测定,当Ct≤32且有明显的指数扩增曲线,判定为PRRSV阳性,Ct>32或者无Ct值则判定为PRRSV阴性。该方法检测下限为1×10^0.5TCID50病毒,高于常规RT-PCR国家标准(GB/T18090-2008),批内和批间变异系数均小于1%。PRRSV人工感染仔猪15份肺脏组织和60份血清样品检测结果均为阳性,SPF仔猪8份肺脏组织和25份血清检测结果均为阴性。采集245份临床仔猪肺脏组织病料检测,PRRSV阳性率为67.35%,明显高于普通RT-PCR检测阳性率(56.33%)。上述结果表明,本方法可用于PRRSV临床病料检测。

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