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一种侧流试纸结合FAM重组酶聚合酶扩增(RPA)诊断布鲁氏菌感染的方法

葛志毅; 周建华; 尚佑军; 李学瑞; 刘永生; 赵鹭; 孙晶晶; 曹小安 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 兰州730000

关键词:布鲁氏菌 rpa 侧流试纸 田间检测 

摘要:目的为了更加方便布鲁氏菌病(布病)检测,增加布病检测方法的多样性。方法根据布鲁氏菌特异基因的保守序列,设计引物与探针,利用Twist Amp? nfo试剂盒提供的聚合酶扩增体系对布鲁氏菌基因组进行快速等温扩增,扩增产物用PCRD试剂盒侧流试纸进行检测,进而判断结果。其实验过程为确定最佳反应条件,检测特异性和敏感性,并与QPCR同时检测样品,比较符合率。结果 38℃反应10 min为最佳条件,特异性结果良好,敏感性能达到10-5(8拷贝),与QPCR检测结果符合率高,以此建立本方法。结论该方法具有特异性强、敏感性好、操作过程简单、检测快速等优点,增加了布病检测方法的多样性,同时为野外田间布病的检测提供了一种可能。

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