HPLC-FLD法测定欧前胡素对肿瘤耐药细胞悬液中罗丹明123含量的影响

关键词：欧前胡素 肿瘤 

摘要：目的:建立高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)测定肿瘤耐药细胞中罗丹明123(Rho 123)的浓度,并采用建立的检测方法考察欧前胡素对Rho 123含量的影响。方法:用乙腈沉淀法进行蛋白沉淀。色谱柱为Phenomenex-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为40℃,流动相为乙腈-1%三乙胺(磷酸调至p H为3.0()28∶72),流速为1 mL·min-1,激发波长485 nm,发射波长546 nm,进样量为20μL。结果:Rho 123标准曲线为Y=1.199 3X-4.003 6(R2=0.999 7),其质量浓度在9.375~600 ng·mL-1范围内线性良好,定量下限为1.172 ng·mL-1,日内与日间精密度均小于10%,绝对回收率为70.6%~80.6%,相对回收率为91.0%~106.7%,长期、短期以及反复冻融稳定性良好。2、5、10μg·mL-1欧前胡素组的A2780/Taxol与K562/ADR细胞内的蓄积倍数分别为2.79、3.53、4.18与2.18、2.36、2.39。结论:本方法专属性强,灵敏度高,简单可靠,适用于检测肿瘤耐药细胞悬液中Rho 123的浓度,可用于细胞中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的活性和功能评价。欧前胡素对肿瘤耐药细胞中P-gp介导的Rho 123外排具有抑制作用。

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