关键词：纳米荧光蛋白 原核表达 纯化 

摘要：由荧光素酶（luciferase）催化的一大类发光反应被统称为生物发光（bioluminescence），该反应具有背景低、灵敏度高、线性范围广等特点，是高灵敏检测的发展方向之一。课题组在近期的研究中全基因合成了一种纳米荧光素酶（nanoluciferase），研究清楚了其理化性质的基础上，将其作为一种新型的生物发光检测工具。将荧光素酶基因克隆至原核高表达载体上，通过自动诱导系统进行了表达。通过Ni—NTA亲和层析纯化和分子筛将重组纳米荧光素酶进行纯化，其产量可稳定达到每升菌25．3mg，纯度超过98％；通过酶活实验鉴定了纳米荧光素酶的活性，在1．0×10^-4～1．0×10^-ms／mE的范围内，该酶均具有良好的线性反应，其线性检测下限低至1．0×10^-4mg/mL（约5pmol）。纳米荧光素酶具有灵敏度高、数据重复性好、操作简便、稳定性高、易于保存等多重优点，可利用其作为基础平台，开发具有应用前景的超灵敏新型生物发光探针。

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