关键词：蔗糖磷酸化酶 酶学性质 分子改造 转糖苷 

摘要：【背景】蔗糖富集土壤是蔗糖磷酸化酶的重要来源之一。此酶能以较廉价的蔗糖为底物进行转葡萄糖基反应,改善受体底物的理化性质,因而具有重要的应用价值。【目的】研究蔗糖富集土壤中蔗糖磷酸化酶的酶学性质和转糖苷活性,为其更优质的改造提供材料和理论基础。【方法】将宏基因组中获得的蔗糖磷酸化酶基因克隆到表达载体上构建重组大肠杆菌,诱导表达并进行镍亲和层析纯化蛋白。以蔗糖为底物测量重组酶的基本酶学性质,研究其对糖类底物的转糖苷活性。通过底物通道分析,利用反向PCR技术对其第155位点进行饱和突变,并测定突变体基本酶学性质和转糖苷活性。【结果】纯化的酶蛋白分子量大小约为56 kD,活性状态时以三聚体形式存在。在以蔗糖为底物时,最适温度和最适pH值分别为55°C和6.5;Km和Vmax值分别为23.1±2.4 mmol/L和407.9±8.5μmol/(mg·min),对第155位点进行了定点饱和突变,获得了部分酶学性质或转糖苷活性改善的突变体。【结论】宏基因组中蔗糖磷酸化酶的研究丰富了酶学数据,并通过分子改造获得了部分性质更优的突变体,为转糖苷活性关键氨基酸的研究和该酶的工业应用奠定了基础。

微生物学通报杂志要求:

{1}来稿研究内容如属各级基金资助项目，须在首页脚注标明其名称，并注明编号。

{2}来稿应严谨遵守学术规范，内容表述清晰，语言流畅通达，逻辑严密。

{3}内文的图、表，请按规范要求绘制，并标明图序、表序、图题、表题。

{4}注释：是作者对文章某一内容或词语的必要解释或说明，其内容或词语应以加圈数字的上标形式顺序标出，注释性文字按顺序置于参考文献之前。例：机联网络①。

{5}正文文字请用宋体五号；独立引文用仿宋五号（起四回二）。

注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社