高表达抗PD-1单克隆抗体细胞株工艺开发的研究

关键词：单克隆抗体 细胞株 工艺开发 

摘要：以PD-1分子为靶点,以中国仓鼠卵巢(CHO)细胞为宿主,构建高表达抗PD-1单克隆抗体的细胞株,优化细胞株筛选工艺,优化工艺参数,得到稳定高表达PD-1细胞株。运用悬浮细胞CHO表达抗PD-1的抗体,首先在质粒构建中,将重链和轻链插到同一个载体上,保证了重链和轻链的比例为1∶1,实现共表达,轻重链在一个载体上,再同PD-1基因共转染,对后面的基因扩增筛选提供基础。采用悬浮培养,使用化学成分确定的培养基CD培养基,支持重组CHO细胞的生长,达到高密度培养,从而得到高表达蛋白。结果表明蛋白表达量稳定性分析表明,筛选出两株表达量较高的细胞株,表达量分别达到2.03g/L和2.09g/L,为抗PD-1抗体的生产提供了稳定高产的细胞系。得到了稳定高表达PD-1细胞株,且蛋白质量与原研药一致。

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