关键词：牛精子 蛋白质组学 样品前处理 蛋白质提取液 酶解方法 

摘要：本文主要分析样品前处理对牛精子全蛋白质组鉴定的影响,文中对5种不同的蛋白质提取液和3种不同的酶解方法进行了系统地分析比较.5种蛋白质提取液:溶液BS(4%SDS,0.1mol/L Tris-HCl,0.1mol/L DTT);溶液BU(8mol/L Urea,0.1mol/L Tris-HCl);溶液BT(7mol/L Urea,2mol/L Thiourea,0.1mol/L Tris-HCl,0.4%Chaps);溶液BR(购自Thermo,货号89901);溶液BD(2%SDC,50mmol/L NH4HCO3,25mmol/L NaCl).3种酶解方法:溶液内酶解、胶内酶解以及膜上酶解(FASP).实验结果显示:牛精子蛋白质提取能力BS最强,BU最弱;BT、BR以及BD相当.BS-FASP不适用于牛精子蛋白质组学研究.胶内酶解鉴定到的蛋白质均多于FASP法,但是胶内酶解操作过程复杂繁琐,耗时长.基于BD的溶液内酶解法鉴定到的蛋白质数量最多,膜蛋白提取鉴定能力较强,且操作时间最短,是较为理想的方法.

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