雷帕霉素对小鼠腭突细胞生物学特性的影响

关键词：雷帕霉素 腭突细胞 自噬 小鼠 

摘要：目的:研究雷帕霉素对小鼠腭突细胞(MEPCs)生物学特性的影响。方法:取胎龄13.5天的小鼠,分离培养MEPCs,加入不同浓度(0、5、10、50、100nmol/L)的雷帕霉素,观察MEPCs活性、凋亡、迁移、成骨情况,选择最佳作用浓度。Western blot法观察在此浓度下不同的作用时间(0、3、6、12、24、48h)自噬标志物LC3Ⅱ和p62/SQSTM1表达水平的变化。结果:6h内,雷帕霉素促进MEPCs增殖,10nmol/L雷帕霉素作用效果最明显;而6h后,雷帕霉素抑制MEPCs增殖,其作用呈时间依赖性,作用时间越长,抑制增殖作用越强。6h内,雷帕霉素抑制MEPCs凋亡,其中10nmol/L抑制效果最明显;而6h后,雷帕霉素促进细胞凋亡。细胞划痕结果表示,雷帕霉素促进MEPCs迁移,作用时间越长、浓度越高,促进迁移作用越强。雷帕霉素处理组抑制MEPCs成骨分化,碱性磷酸酶、茜素红染色及钙离子浓度结果显示,随着成骨诱导时间的延长,抑制作用增强,RT-PCR结果显示成骨相关基因的表达低于对照组。雷帕霉素作用下,随着作用时间的延长,LC3Ⅱ的表达明显增加,p62/SQSTM1的表达与对照组相比明显降低,呈时间依赖性,雷帕霉素促进了自噬。结论:雷帕霉素可能是通过促进自噬影响腭突细胞的生物学特性。

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