核仁磷酸蛋白基因NPM1敲除人宫颈癌细胞株的构建及功能

关键词：核仁磷酸蛋白1 人类宫颈癌细胞 基因敲除 细胞增殖 

摘要：目的通过CRISPR/Cas9系统定向敲除人类宫颈癌细胞(HELA)的核仁磷酸蛋白1基因(nucleophosmin1,NPM1),探讨敲除对HELA细胞生物学行为的影响。方法利用crispr.mit.edusgRNA在线设计工具设计sgRNA,通过T7E1系统筛选合适的sgRNA,将设计好的质粒通过转染的方式转入HELA细胞株,通过博来霉素(zeocin)抗生素进行筛选,通过Westernblot,PCR,基因测序等手段确认敲除细胞系的建立,通过免疫荧光的方式观察敲除细胞株。结果T7E1酶切PCR退火产物之后琼脂糖凝胶结果表明,CRISPR/Cas9系统对HELA细胞基因组进行了切割,并在同源重组时发生了碱基错配;Westernblot结果说明基因敲除后NPM1蛋白表达消失;基因测序的结果表明敲除细胞系建立的成功;免疫荧光的结果表明该细胞系出现异常核仁现象。结论NPM1敲除后细胞核仁异常,可能影响细胞正常生命进程。

解剖科学进展杂志要求:

{1}来稿摘要从文章正文提炼，尽量使用原文字句，体现文章特色或重点。字数在200字左右为宜，关键词3-5个。

{2}来稿需包括文章名、内容提要、关键词。内容提要需能简明扼要、客观准确地体现出论文的主要观点；关键词要以分号分隔并列。

{3}本刊收到投稿后，会及时进行送审等工作，如逾3个月无回音，作者可自行处理，请勿一稿多投. 编辑部对录用稿件有权作技术性和文字上的修改。

{4}文中小标题一般分为三级，第一级标题用“一、”、“二、”、“三、”标示;第二级标题用“1．”、“2．”、“3．”标示，第三级标题用“(1)”、“(2)”、“(3)”标示，每级标题序号前均空两格。

{5}参考文献必须以作者亲自阅读过的近年主要公开文献为限，勿引内部资料，尽量少引教科书。

注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社