对乙酰氨基酚诱导HepG2细胞氧化应激损伤模型的构建

关键词：对乙酰氨基酚 hepg2细胞 氧化应激损伤 细胞模型 

摘要：目的建立以对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)诱导的HepG2细胞氧化应激损伤模型。方法噻唑蓝〔MTT〕法检测HepG2细胞活力;微板法检测细胞培养液中天门冬氨酸氨基转氨酶(AST)、丙氨酸氨基转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量,细胞中超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)活性;利用荧光探针(DCFH-DA)法对HepG2细胞内活性氧的水平(ROS)进行检测;JC-1染色法检测不同浓度APAP对HepG2细胞线粒体膜电位的影响;Hoechst染色观察细胞凋亡情况。结果随着APAP处理时间和浓度增加,HepG2细胞相对活力明显降低,细胞数量减少,并伴随着皱缩、变圆甚至漂浮等形态学变化;细胞培养液中的ALT、AST和LDH含量显著升高,而细胞中的CAT和SOD活性明显下降;另外,胞内ROS水平和线粒体膜电位发生显著变化,细胞凋亡显著增加。诱导Hep G2细胞产生氧化应激损伤模型最佳条件为APAP浓度30mmol·L-1,细胞作用时间12h。结论本研究构建了APAP体外氧化应激细胞损伤模型,为保肝活性药物筛选及其作用机制研究提供细胞学模型。

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