关键词：链球菌 猪 荧光定量pcr 量值溯源 

摘要：目的针对病原微生物检测中急需解决的计量标准和量值溯源问题，建立猪链球菌核酸量值荧光定量PCR方法，研制猪链核酸检测标准物质，探索等效一致的核酸测量技术。方法根据已报告的DNA序列设计并合成种特异性16SrRNA引物，建立荧光定量WaR方法，摸索最佳上、下游引物配比浓度，利用已知核酸浓度的标准品作标准曲线并获得0值与样本起始拷贝数的关系，对方法的特异性、灵敏度、稳定性和不确定性进行评估，并进行DNA标准品效期实验。结果建立的猪链球菌DNA实时定量PCR方法，最佳引物浓度为上游0．6μmoL／L，下游0．3μmol／L。方法的灵敏度为18．6DNA拷贝数，DNA最佳检出浓度为1．86×102—1．86×104拷贝／10vL反应体系。0值只与模板的DNA起始浓度有关（F：597．60，P〈0．01），与不同的实验时间及实验人员（F=0．60、1．90，P〉0．05）无关。0值的不确定度为0．46％～5．40％。DNA标准品4oC可保存半年以上，而一60℃保存则可达1年以上。结论建立的荧光定量PCR方法特异性及稳定性良好，可用于猪链球菌核酸量值测定；制备的核酸标准物质具备国际计量标准，且稳定性好，可作为猪链球菌核酸检测的量值溯源和传递示范的标准物质。

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