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关键词:血吸虫 日本 抗原 蛋白质组
摘要:目的应用免疫蛋白质组研究方法筛选、鉴定日本血吸虫尾蚴、童虫可溶性抗原蛋白质。方法日本血吸虫尾蚴可溶性粗抗原(scAP)、童虫可溶性粗抗原(SLAP)分别用双向凝胶电泳(2-DE)分离蛋白质,每样本同时制3块胶,1块胶进行银染,2块胶通过电转印后再分别用感染兔和正常兔血清作Western印迹分析,确定特异性阳性反应点,再从相应银染胶图上找到匹配的抗原蛋白质点;用MALDI.TOWTOF串联质谱鉴定抗原蛋白质。结果SCAP、SLAP与感染兔血清免疫反应分别获得94个和68个阳性点,在相应的银染胶图上分别获得33个和31个匹配蛋白质点;用MALDI.TOF/TOF串联质谱鉴定和NCBI数据库检索,鉴定成功率分别为100.O%(20/20)和68.2%(15/22)。已获鉴定的SCAP抗原中蛋白酶占62.5%(10/16),SLAP抗原中蛋白酶占36.4%(4/11);2个抗原蛋白为SCAP和SLAP共有。结论2-DE能有效地分离日本血吸虫可溶性抗原蛋白质,2-DWestern印迹法能较好地筛选特异性抗原;2-DWestern印迹法阳性点与2-DE胶图蛋白质点匹配率低,低丰度的抗原蛋白质易被漏检;尾蚴和童虫的抗原蛋白质组差异较大。
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